本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数（KD）和多糖在规定KD值以前的回收率。
　　试剂、色谱柱的制备与色谱柱标定  同通则3419第二法。
　　测定法  取供试品约1ml（含多糖抗原3～5mg），加至已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，流速为每小时15～20ml，用组分收集器收集洗脱液，每管3～5ml。照O-乙酰基测定法（通则3117），测定每管洗脱液中O-乙酰基的含量，求出O-乙酰基含量最高时的洗脱体积，即为多糖主峰峰顶洗脱体积Ve。
　　按下式计算∶
　　
　　式中KD为供试品分配系数；
　　Ve为供试品洗脱液体积，ml；
　　Vo为空流体积，ml；
　　Vi为柱床体积，ml。
　　计算供试品在KD值≤0.25的多糖回收率∶
　　
　　式中Rx为KD值≤0.25供试品的多糖回收率，%；
　　Ax为供试品在KD值≤0.25各管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量；
　　At为供试品所有管洗脱液等体积合并液的O-乙酰基含量。
　　【附注】过柱操作在10～20℃进行。