下列各类培养基常用于测定细菌的糖类代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、碳源和氮源利用试验等生化反应。
　　1.糖、醇发酵培养基
　　（1）成分
　　基础液
　　蛋白胨	                                                                                             10g
　　氯化钠                                                                                               	5g
　　0.5%酸性品红指示液	                                                                           10ml
　　（或0.4%溴麝香草酚蓝指示液）                                           	        （6ml）
　　水	                                                                                               1000ml
　　糖、醇类	                                                            每100ml基础液内各加0.5g
　　（2）制法 取蛋白胨和氯化钠加入水中，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入指示液混匀。每100ml分别加入1种糖、醇或糖苷，混匀后分装于小管中（若需观察产气反应，在小管内另放置杜汉小倒管）。于116℃灭菌15分钟。
　　常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纤维二糖、蜜二糖、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、淀粉、甘露醇、卫矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水杨素、七叶苷等。
　　(3) 用途 鉴别各种细菌对糖类的发酵生化反应，发酵者产酸，培养基变色(加酸性品红者由无色至红色或再至黄色；加溴麝香草酚蓝者由蓝色至黄色)；产气时，小倒管内有小气泡。
　　2.七叶苷培养基
　　(1)成分
　　蛋白胨	        5g	七叶苷	3g
　　磷酸氢二钾	1g	水	1000ml
　　枸橼酸铁	0.5g
　　(2)制法 除七叶苷外，取上述成分混合，微温使溶解，加入七叶苷混匀，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于试管中，121℃灭菌15分钟。
　　(3)用途 用于鉴别细菌对七叶苷的水解试验，产生棕黑色沉淀为阳性反应。
　　3.磷酸盐葡萄糖胨水培养基
　　(1)成分
　　蛋白胨       	7g   葡萄糖	5g
　　磷酸氢二钾	3.8g水	1000ml
　　(2)制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
　　(3)用途 用于鉴别细菌的甲基红试验(M-R反应)和乙酰甲基甲醇试验(V-P反应)。
　　①甲基红试验(M-R反应) 取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35℃培养2~5天，于培养管内加入甲基红指示液(称取甲基红0.1g，加95%乙醇300ml，使溶解后，加水至500ml)数滴，立即观察，呈鲜红色或橘红色为阳性，呈黄色为阴性。
　　②乙酰甲基甲醇生成试验(V-P反应) 取可疑菌落或斜面培养物，接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，置35℃培养48小时，量取2ml培养液，加入α-萘酚乙醇试液(称取α-萘酚5g，加无水乙醇溶解使成100ml)1ml，混匀，再加40%氢氧化钾溶液0.4ml，充分振摇，立刻或数分钟内出现红色，即为阳性反应；无红色反应为阴性，如为阴性反应，置35℃水浴4小时后再观察。
　　4.蛋白胨水培养基
　　(1)成分
　　蛋白胨	10g	水	1000ml
　　氯化钠	5g
　　(2)制法 取上述成分混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管，121℃灭菌15分钟。
　　(3)用途 用于鉴别细菌能否分解色氨酸而产生靛基质的生化反应。
　　①靛基质试验 取可疑菌落或斜面培养物，接种于蛋白胨水培养基中，置35℃培养24~48小时，必要时培养4~5天，沿管壁加入靛基质试液数滴，液面呈玫瑰红色为阳性，呈试剂本色为阴性。
　　②靛基质试液 称取对二甲氨基苯甲醛5g，加入戊醇(或异戊醇)75ml，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸25ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深。或称取对二甲氨基苯甲醛1g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，再取盐酸20ml徐徐滴入。
　　5.三糖铁琼脂培养基
　　(1)成分
　　蛋白胨        	20g	硫酸亚铁    	0.2g
　　牛肉浸出粉	5g	硫代硫酸钠	0.2g
　　乳糖	    10g	0.2%酚磺酞指示液	12.5ml
　　蔗糖  	10g	琼脂	                       12~15g
　　葡萄糖	1g	水	                     1000ml
　　氯化钠	5g		
　　(2)制法 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121℃灭菌15分钟，制成高底层(2~3cm)短斜面。
　　(3)用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。
　　方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35℃培养24~48小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层变黄色为乳糖、蔗糖发酵阳性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
　　6.克氏双糖铁琼脂培养基
　　(1)成分
　　蛋白胨        	20g	枸橼酸铁	0.3g
　　牛肉浸出粉	3g	硫代硫酸钠	0.3g
　　酵母浸粉	     3g	0.2%酚磺酞指示液	12.5ml
　　乳糖	              10g	 琼脂	        12~15g
　　葡萄糖       	1g	水	       1000ml
　　氯化钠	5g		
　　(2)制法 除乳糖、葡萄糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热溶胀后，再加入其余成分，摇匀，分装，121℃灭菌15分钟，制成高底层(2~3cm)短斜面。
　　(3)用途 用于初步鉴别肠杆菌科细菌对糖类的发酵反应和产生硫化氢试验。
　　方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，做高层穿刺和斜面划线接种，置35℃培养24~48小时，观察结果。培养基底层变黄色为葡萄糖发酵阳性，斜面层呈黄色为乳糖发酵阳性，斜面层呈红色为乳糖发酵阴性；底层或整个培养基呈黑色表示产生硫化氢。
　　7.脲(尿素)培养基
　　(1)成分
　　蛋白胨	1g	0.2%酚红溶液	6ml
　　葡萄糖	1g	20%无菌脲溶液100ml
　　氯化钠	5g	水	1000ml
　　磷酸氢二钾	2g
　　(2)制法 除脲溶液外，取上述成分，混合，调pH值使灭菌后为6.9±0.1，混匀后，121℃灭菌15分钟，冷至50~55℃，加入无菌脲溶液(经膜除菌过滤)，混匀，分装于灭菌试管中。
　　(3)用途 用于鉴别细菌的尿素酶反应。
　　方法和结果观察：取可疑菌落或少量斜面培养物接种于培养基内，置35℃培养24小时，观察结果。培养基变为红色为尿素酶反应阳性；不变色为阴性，阴性者需延长观察至1周。
　　8.苯丙氨酸琼脂培养基
　　(1)成分
　　磷酸氢二钠	1g	氯化钠	5g
　　酵母浸膏    	3g	琼脂	12~15g
　　DL-苯丙氨酸(DL-phenylalanine)	2g	水	1000ml
　　(或L-苯丙氨酸)	(1g)		
　　(2)制法 除琼脂外，取各成分溶于水，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，再加入琼脂，加热溶胀，分装试管，121℃灭菌15分钟，制成长斜面。
　　(3)用途 用于鉴别细菌的苯丙氨酸脱氨酶试验(也称苯丙酮酸试验)。
　　方法和结果观察：取斜面培养物，大量接种于苯丙氨酸琼脂斜面，置35℃培养4小时或18~24小时，取4~5滴10%三氯化铁溶液试剂，由斜面上部流下，若出现墨绿色，即为苯丙氨酸脱氨酶试验阳性；倘若不变色则为阴性。
　　9.氨基酸脱羧酶试验培养基
　　(1)成分
　　①基础液
　　蛋白胨	5g	1.6%溴甲酚紫指示液	1ml
　　酵母浸出粉	3g	水	1000ml
　　葡萄糖	1g		
　　②氨基酸			
　　L-赖氨酸	0.5g	(需加碱溶液溶解)	
　　L-鸟氨酸	0.5g	(需加碱溶液溶解)	
　　L-精氨酸	0.5g	(不需加碱溶液溶解)	
　　(2)制法 先配制基础液备用；将溶解后的3种氨基酸，各分别加至100ml基础液(使氨基酸的终浓度为0.5%)，混匀，调pH值使灭菌后为6.8。分装于小试管中，每管2.5ml并滴加1层液状石蜡；同时分装一部分基础液于小试管，作为对照培养基，均置116℃灭菌10分钟。
　　(3)用途 用于鉴别细菌的脱羧酶、双水解酶试验。
　　方法和结果观察：取疑似菌斜面培养物分别接种于上述3种培养基及基础液对照培养基，置35C培养24~48小时。在培养初期由于待检细菌发酵葡萄糖产酸，试验培养基和对照培养基应呈黄色，继续培养时，试验培养基如呈紫色或紫红色，即为阳性反应；如至培养末期，培养基仍同对照管呈黄色，则判为阴性反应。
　　10.明胶培养基
　　(1)成分
　　蛋白胨	5g	明胶	120g
　　牛肉浸出粉     3g	水	1000ml
　　(2)制法 取上述成分加入水中，浸泡约20分钟，加热溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
　　(3)用途 用于细菌的明胶液化试验。
　　方法和结果观察：取少量待检菌斜面培养物穿刺接种于明胶培养基内，置35℃培养24小时，取出置冰箱内10~20分钟。如培养基仍呈溶液状，则为阳性；培养基重新凝固，则为阴性。细菌液化明胶之作用有时甚为缓慢，如未见液化，需继续培养1~2周方可确定阴性。
　　11.丙二酸钠培养基
　　(1)成分
　　酵母浸出粉	1g	磷酸二氢钾	0.4g
　　氯化钠	2g	丙二酸钠	3g
　　葡萄糖	0.25g	0.4%溴麝香草酚蓝指示液	6ml
　　硫酸铵	2g	水	1000ml
　　磷酸氢二钾	0.6g		
　　(2)制法 除指示液外，将上述成分溶解，调pH值使灭菌后为6.8，再加入指示液。分装小管中，121℃灭菌15分钟。
　　(3)用途 用于鉴别细菌能否利用丙二酸钠作为碳源而生长繁殖。
　　方法和结果观察：取斜面或肉汤培养物接种于丙二酸钠培养基内，置35℃培养48小时。于24小时和48小时后各观察1次结果。培养基颜色由绿色变成蓝色为阳性反应；无颜色变化，或由绿色变成黄色，则为阴性反应。
　　12.枸橼酸盐培养基
　　(1)成分
　　氯化钠	5g	枸橼酸钠(无水)	2g
　　硫酸镁	0.2g	1.0%溴麝香草酚蓝指示液	10ml
　　磷酸氢二钾	1g	琼脂	14g
　　磷酸二氢铵	1g	水	1000ml
　　(2)制法 除指示液和琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为6.9±0.1，加入琼脂，加热溶胀，然后加入指示液，混匀，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟，制成斜面。
　　(3)用途 用于鉴别细菌能否利用枸橼酸盐作为碳源和氮源而生长繁殖。
　　方法和结果观察：取可疑菌落或斜面培养物，接种于枸橼酸盐培养基的斜面上，一般培养48~72小时，凡能在培养基斜面生长出菌落，培养基即由绿色变成蓝色者为阳性反应；无菌落生长，培养基仍绿色者为阴性反应，阴性反应者应继续培养观察至7天。
　　13.硝酸盐胨水培养基
　　(1)成分
　　蛋白胨	10g	硝酸钾	2g
　　酵母浸出粉3g	水	1000ml
　　(2)制法 取上述成分，加热溶解，调pH值使灭菌后为7.3±0.1，分装于小试管中，121℃灭菌15分钟。
　　(3)用途 用于鉴别细菌能否还原硝酸盐成亚硝酸盐。
　　方法和结果观察：取待检菌培养物接种于硝酸盐胨水培养基中，置35℃培养24小时。将下列甲液和乙液于用前等量混合，每个培养物加混合物0.1ml，产生红色为阳性反应，不产生红色为阴性反应。
　　甲液：称取α-萘胺5g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。
　　乙液：称取磺胺酸(对氨基苯磺酸)8g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。
　　14.石蕊牛奶培养基
　　(1)成分
　　脱脂奶粉	10g	水100ml
　　10%石蕊溶液	0.65ml
　　(2)制法 取上述成分混匀后，分装于小试管中，116℃灭菌10分钟。
　　(3)用途 用于检查细菌对牛奶的凝固和发酵作用。
　　15.半固体营养琼脂培养基
　　(1)成分
　　蛋白胨	10g	琼脂	4g
　　牛肉浸出粉	3g	水	1000ml
　　氯化钠	5g
　　(2)制法 除琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调pH值使灭菌后为7.2±0.2，再加入琼脂，加热溶胀，分装于小管中，121℃灭菌15分钟后，直立放置。待凝固后备用。
　　(3)用途  用于观察细菌的动力，也可用于一般菌种的保存。
　　细菌动力检查：取疑似菌斜面培养物穿刺接种于半固体营养琼脂培养基中，置35℃培养24小时，细菌沿穿刺外周扩散生长，为动力阳性；否则为阴性。阴性者，应再继续培养观察2~3天。