3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法
  本法系依据绵羊红细胞经醛化和糅酸化处理后,具有较强的吸附蛋白质的能力,能将白喉类毒素吸附于红细胞表面上,若遇到供试品中相应抗体,会发生抗原抗体结合,产生特异性凝集,通过比较凝集反应终点测定供试品中白喉抗体效价。
  试剂  (1)1%兔血清生理氯化钠溶液  无菌采集兔全血,分离血清,置56℃、30分钟灭能。取0.5ml兔血清加49.5ml生理氯化钠溶液,混匀。
  (2)白喉抗体诊断红细胞悬液用  1%兔血清生理氯化钠溶液复溶冻干白喉抗体诊断红细胞至5%悬液。
  白喉抗体标准品溶液的制备  用1%兔血清生理氯化钠溶液将白喉抗体标准品稀释至每1ml含0.2HAU。
  供试品溶液的制备  用1%兔血清生理氯化钠溶液将供试品稀释4倍。
  测定法  在UV型血凝板上,用1%兔血清生理氯化钠溶液将供试品溶液做2倍系列稀释,每孔留25μl,再向每孔加25μl白喉抗体诊断红细胞悬液,置振荡器混匀30~60秒,放湿盒内37℃结合1小时。
  在UV型血凝板上,用1%兔血清生理氯化钠溶液将白喉抗体标准品溶液做2倍系列稀释,每孔留25μl。自“再向每孔加25μl白喉抗体诊断红细胞悬液”起,同法操作。
  在UV型血凝板上,加1%兔血清生理氯化钠溶液25μl,自“再向每孔加25 μl白喉抗体诊断红细胞悬液”起,同法操作,为阴性对照。
  阴性对照孔呈典型的“-",否则试验不成立,应重试。以出现"++"为判定终点,按下式计算供试品白喉抗体效价:
  
  式中E为出现“++”的最高稀释倍数的标准品的白喉抗体效价,HAU/ml;
  n为出现“++"的供试品的最高稀释倍数;
  F为静注人免疫球蛋白供试品蛋白质含量,g/ml;或人免疫球蛋白供试品蛋白质含量,g/ml。
  【附注】(1)判定标准
  ”-”红细胞集中在孔底中央,呈一边缘光滑致密的小红点;
  ”+"大部分红细胞沉于孔底中央,周围有少量的红细胞;
  ”++"红细胞部分凝集,孔底中央有一疏松的小红圈;
  ”+++”大部分红细胞凝集呈均匀分布,孔底中央有很弱的小红圈;
  "++++”红细胞凝集呈均匀分布。
  (2)血凝板孔要保持清洁干净,避免表面磨损,否则红细胞不易下沉,易出现假阳性。


审核人:明镜、紫菀
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