第一法  NIH法
　　本法系将不同稀释度的供试品和参考疫苗分别免疫小鼠，通过比较免疫后的小鼠对致死性狂犬攻击病毒的保护剂量，确定供试品的效价。
　　试剂  稀释液（PBS）  量取0.9%磷酸二氢钾溶液75ml、2.4%磷酸氢二钠（Na2HPO4・12H2O）溶液425ml、8.5%氯化钠溶液500ml，混合后加水至5000ml，调pH值至7.2～8.0。
　　攻击毒株CVS制备  启开毒种，稀释成10-2悬液，接种10～12g小鼠，不少于8只，每只脑内接种0.03ml，连续传2～3代，选择接种4～5天有典型狂犬病症状的小鼠脑组织，研磨后加入含2%马血清或新生牛血清制成20%悬液，经每分钟1000转离心10分钟，取上清液经病毒滴定（用10只18～20g小鼠滴定）及无菌检查符合规定后作攻击毒用。
　　参考疫苗的稀释  参考疫苗用PBS稀释成1∶25、1∶125和1∶625等稀释度。
　　供试品溶液的制备  供试品用PBS做5倍系列稀释。
　　测定法  用不同稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫12～14g小鼠16只，每只小鼠腹腔注射0.5ml，间隔1周再免疫1次。
　　小鼠于第一次免疫后14天，用经预先测定的含5～100LD50的病毒量进行脑内攻击，每只0.03ml；同时将攻击毒稀释成100、10-1、10-2和10-3进行毒力滴定，每个稀释度均不少于8只小鼠。小鼠攻击后逐日观察14天，并记录死亡情况，统计第5天后死亡和呈典型狂犬病脑症状的小鼠。
　　计算供试品和参考疫苗ED50值。
　　计算相对效力∶
　　
　　式中P为供试品效价，IU/ml；
　　T为供试品ED50的倒数；
　　S为参考疫苗ED50的倒数；
　　dT为供试品的1次人用剂量，ml；
　　dS为参考疫苗的1次人用剂量，ml；
　　D为参考疫苗的效价，IU/ml。
　　【附注】（1）动物免疫时应将疫苗保存于冰浴中。
　　(2)  各组动物均应在同样条件下饲养。
　　(3)  攻击毒原病毒液（100）注射的小鼠应80%以上死亡。
　　第二法  改良NIH法
　　本法系在NIH法基础上，取单一稀释度的供试品及参考疫苗免疫小鼠，通过小鼠脑内攻击狂犬病病毒所得小鼠保护力水平，比较供试品和参考品疫苗对小鼠的保护率判定供试品疫苗效价是否合格。改良NIH法为定性或半定量效价测定方法，采用该法应满足以下条件：
　　(1)釆用该方法的实验室应为已建立稳定的NIH法且检定结果一致性好，对NIH法的变异控制在较好范围的实验室；
　　(2)用于具有连续2年及以上生产时间、糖蛋白抗原含量稳定、产品质量控制稳定、其连续批次效价均高于国家批准的放行标准的产品；
　　(3)实验室应通过充分验证证明改良NIH法与NIH法具有良好的一致性；并根据具体情况（如每年的生产批次或生产周期情况）定期对该方法进行评估，至少每2年应进行一次评估，以确保该方法的可靠性。
　　(4)采用改良NIH法测定效价不合格时，应以NIH法测定，并作为最终判定结果。
　　试剂  同NIH法。
　　攻击病毒CVS制备  同NIH法。
　　参考疫苗的稀释  根据NIH法标定的参考疫苗ED50，采用NIH法试剂项下PBS将参考疫苗稀释至适宜的稀释度。
　　供试品溶液的制备  根据疫苗的出厂效价标准、标示装量及参考疫苗的效价，采用NIH法试剂项下PBS将供试品稀释至适宜的稀释度。
　　测定法  取单一稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫12～14g小鼠10只，每只小鼠腹腔注射0.5ml，间隔一周再免疫一次。其余同NIH法。
　　结果判定  当供试品的小鼠保护率大于参考疫苗时，供试品的效价判为合格。
　　【附注】除NIH法附注条件外，还应满足以下条件。
　　(1)参考疫苗组及供试品组小鼠在攻击病毒后第5天，存活小鼠数应不少于8只。
　　(2)参考疫苗保护率、攻击病毒的量应控制在一定范围内。
　　(3)参考疫苗及供试品稀释度系依据参考疫苗联合标定的ED50及效价结果而确定，更换参考疫苗批次时需重新计算并确定稀释倍数。