（小鼠试验法）
本法依据抗毒素能中和毒素的作用，将供试品与标准品做系列稀释，分别与相应毒素结合，注入小鼠体内，在规定的时间内，比较小鼠存活和死亡情况，以测定供试品效价。
试剂
（1）稀释液 称取氯化钠8.5g、硼酸4.5g、四硼酸钠（Na
2B
4O
7•10H
2O）0.5g，用水溶解并稀释至1000ml，过滤。灭菌后pH值应为7.0~7.2。
（2）气性坏疽毒素溶液 由国家药品检定机构提供，亦可自备。试验用的气性坏疽毒素须以国家药品检定机构分发的气性坏疽抗毒素标准品准确标定其试验量（见测定参数表），并每3个月复检1次。使用前将毒素用稀释液稀释至每1ml含5个（水肿型为20个）毒素试验量。
气性坏疽抗毒素标准品溶液的制备 气性坏疽（产气荚膜、水肿、败毒、溶组织）抗毒素标准品由国家药品检定机构提供，于2~8℃处避光保存。使用时，将气性坏疽抗毒素标准品溶液用稀释液稀释至每1ml含测定参数表所示效价。气性坏疽抗毒素标准品原倍溶液的1次吸取量应不低于0.5ml。
供试品溶液的制备 将供试品用稀释液稀释成数个稀释度，使每1ml约含5个试验量（水肿型为20个试验量）。各稀释度之间的间隔为5%~10%。
测定法 精密量取气性坏疽抗毒素标准品溶液0.8ml、1.0ml、1.2ml分别置小试管中，按管序分别补加稀释液0.7ml、 0.5ml、0.3ml。精密量取不同稀释度的供试品溶液各1.0ml分别加入小试管中，每管补加稀释液0.5ml（可在抗毒素之前加入）。以上各管分别加入气性坏疽毒素溶液1.0ml（水肿型为0.5ml），混合均匀，加塞，20~25℃结合1个小时，按测定参数表所示剂量与途径，立即注射17~19g小鼠。每稀释度注射小鼠4只。
结果判定 每天上、下午各观察试验动物1次，并记录发病及死亡情况，连续3天。标准品组动物在3天内，注射气性坏疽抗毒素量最少（即0.8ml）的4只动物中至少应有2只以上死亡。对比标准品组与供试品组动物死亡情况，推算供试品的效价。
有下列情况之一者应重试：
（1）标准品组动物在3天内全部死亡或者全无死亡，或者注射气性坏疽抗毒素量最少的4只动物死亡不足半数，注射气性坏疽抗毒素量最多的4只动物死亡超过半数；
（2）供试品组动物在3天内全部死亡或者全无死亡；
（3）动物死亡数极不规则，以致无法进行判定；
（4）每稀释度注射的动物中有2只以上属非特异死亡。
【附注】（1）自备气性坏疽毒素的制法（包括菌种、培养基、培养条件及干燥方法等）应与国家药品检定机构分发者相同。
（2）使用干燥气性坏疽毒素时，须精密称定，每次称取量应不低于10mg，溶解后应1次用完。剩余的干燥毒素应封存于装有干燥剂的真空器皿中，亦可用干燥毒素制成液体毒素，即干燥毒素以生理氯化钠溶液溶解，与中性甘油（经 116℃、10分钟灭菌）等量混合，每1ml至少含50个试验量。毒素应保存于2~8℃避光处。
