3126 IgG含量测定法

3126 IgG含量测定法
    （紫外-可见分光光度法）
    本法系依据免疫球蛋白G（IgG）与相应的抗体特异性结合后，在适宜的电解质、温度、pH条件下，产生凝集反应，形成抗原-抗体复合物，根据供试品的吸光度求出供试品中IgG的含量。
    试剂 （1）缓冲液 称取三羟甲基氨基甲烷（Tris） 12.42g、氯化钠9g、聚乙二醇6000 50g、牛血清白蛋白 （BSA）1g、叠氮化钠（NaN3）1g，加水溶解，用1.0mol/L盐酸调pH值至7.4，加水稀释至1000ml。
    （2）抗人IgG血清 按说明书要求将冻干抗人IgG血清复溶，按标示效价取一定量抗人IgG血清，加缓冲液稀释至抗体最终效价为1：4（例如抗人IgG血清效价为1：100，量取原液2ml加抗体缓冲液48ml），充分混匀，0.45μm膜过滤。4℃保存备用。
    IgG标准品溶液的制备 用生理氯化钠溶液将IgG标准品在每1ml含0.2～6.0mg范围内做适当的系列稀释（通常做5个稀释度）。
    供试品溶液的制备 用生理氯化钠溶液将供试品稀释成高、中、低3个稀释度，其IgG含量均应在标准曲线范围内。
    测定法 取供试品溶液10μl，加入已预热至37℃的抗体液1ml，混匀，每个稀释度做2管，置37℃水浴中保温1小时，充分混匀，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在波长340nm处分别测定吸光度。
    用IgG标准品溶液10μl替代供试品溶液，同法操作。
    计算标准品和供试品不同稀释度溶液的吸光度的均值。以标准品溶液的IgG含量的对数对其相应的吸光度的对数作直线回归，求得直线回归方程，相关系数应不低于0.99；然后将供试品溶液吸光度的对数值代入直线回归方程，求得值的反对数，再乘以稀释倍数，求取每1ml供试品溶液IgG含量，再由供试品各稀释度IgG含量求平均值，即为供试品IgG含量（g/L）。
    【附注】（1）全部反应管必须在10分钟内测量完毕。
    （2）设置紫外分光光度计狭缝宽度（Slit Width）为2nm。
    （3）每次测定可根据供试品IgG含量，适当调整标准品溶液中IgG含量范围。