1219 生长激素生物测定法

1219 生长激素生物测定法
    1.去垂体大鼠体重法
    本法系通过比较生长激素标准品（S）与供试品（T）对幼龄去垂体大鼠体重增加的程度，以测定供试品效价的一种方法。
    标准品溶液的制备 试验当日，取标准品，按标示效价用含0.1％牛血清白蛋白的0.9％氯化钠溶液，制成高、低两种浓度的标准品溶液。一般高浓度标准品溶液配成每1ml含0.1～0.2IU，低浓度标准品溶液配成每1ml含0.025～0.05IU，高低两浓度比值（r）一般为1：0.25，标准品溶液分装成每天剂量并密封于-15℃以下保存，临用时融化。
    供试品溶液的制备 按供试品的标示效价或估计效价（AT），照标准品溶液的制备及保存方法制备和保存。
    测定法 取同一来源、品系，出生26～28天，体重60～80g，同一性别，健康的大鼠，试验前2～3周手术摘除垂体，手术后于屏障环境饲养使其恢复。
    取去垂体手术后2～3周、体重变化小于手术前±10％的大鼠，按体重随机等分成4组，每组至少8只，每只编号并记录体重。分别自颈部皮下注射一种浓度的标准品溶液或供试品溶液0.5ml，每日1次，连续6日。于最后1次给药后24小时，处死大鼠，称体重，必要时实验结束后可进行尸检，切开蝶鞍区，肉眼检查有无垂体残留，剔除有垂体残存的大鼠。每只动物给药后体重增加的克数作为反应值。供试品与标准品各剂量组所致反应的平均值应相当。照生物检定统计法（通则1431）中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。
    本法的可信限率（FL％）不得大于50％。
    2.去垂体大鼠胫骨法
    本法系通过比较生长激素标准品（S）与供试品（T）对去垂体大鼠胫骨骨骺板宽度增加的程度，以测定供试品效价的一种方法。
    标准品溶液和供试品溶液的制备 同体重法。
    测定法 本法可与去垂体大鼠体重法同步进行。待体重法实验结束后，取下两腿胫骨，置10％甲醛溶液保存，从胫骨近心端顶部中间沿矢状面切开，置10％甲醛溶液中保存，水洗10分钟后，置丙酮溶液中10分钟，水洗3分钟，置2％硝酸银溶液中染色2分钟，水洗后置水中强光照射至变棕黑色，于10％硫代硫酸钠溶液固定30秒钟，置80％乙醇溶液中供测量用。测量时沿刨面切lmm左右薄片，置显微镜下测量胫骨骨骺板宽度，作为反应值。照生物检定统计法（通则1431）中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。
    本法的可信限率（FL％）不得大于50％。