1218 降钙素生物测定法

1218 降钙素生物测定法
    本法系通过比较降钙素标准品（S）与供试品（T）对大鼠血钙降低的程度，以测定供试品的效价。
    溶剂的制备 称取牛血清白蛋白0.2g，加水20ml，混匀，置56℃水浴中保温1小时，取出放至室温，于-10～-20℃下冻存。实验前取出，于36℃±0.5℃水浴中将其融化。加至含有2g醋酸钠的水溶液中，加入浓盐酸约3.5ml，再加水至总量近200ml，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值至3.5～4.5，最后加水至200ml。溶剂也可按下述步骤制备：称取氯化钠1.88g、结晶醋酸钠0.5g，置于300ml烧杯中，加入醋酸0.5ml、去离子水250ml，搅拌使溶解，最后加入牛血清白蛋白0.25g，放置20分钟以上，轻轻摇动使溶解，即得，可提前1天配制，4℃保存。
    标准品溶液的制备 试验当日，按降钙素标准品的标示效价，用上述溶剂，按高、低剂量组（dS2、dS1）配成2种浓度的标准品溶液。一般高浓度标准品溶液控制在50～100mIU/ml。高、低剂量的比值（r）不得大于3：1。
    供试品溶液的制备 按供试品中降钙素的标示量或估计效价（AT），照标准品溶液的制备法制成高、低（dT2、dT1）2种浓度的供试品溶液，其比值（r）应与标准品相等，供试品与标准品各剂量组所致反应平均值应相近。
    测定法 取健康合格，体重200～250g（皮下注射，一次实验所用大鼠体重相差不超过20g）、70～80g（静脉注射，一次实验所用大鼠体重相差不超过15g），同一性别，同一来源的大鼠。实验前禁食16小时，自由饮用蒸馏水或去离子水，按体重随机等分成4组，分别为标准品高、低剂量组和供试品高、低剂量组，每组不少于5只。将各组动物称重并编号，分别按体重给各组动物于腹部皮下注射（或尾静脉注射）相应浓度的标准品或供试品溶液，给药体积为0.4ml/100g体重。注射后每只准确计时1小时，然后按给药前后顺序分别自眼静脉丛取血。用适宜的方法，如邻甲酚酞络合剂测定血钙值。照生物检定统计法（通则1431）中量反应平行线测定法计算效价及实验误差。
    本法的可信限率（FL％）不得大于45％。