1211 胰岛素生物测定法

1211 胰岛素生物测定法
    本法系比较胰岛素标准品（S）与供试品（T）引起小鼠血糖下降的作用，以测定供试品的效价。
    标准品溶液的制备 精密称取胰岛素标准品适量，按标示效价，加入每100ml中含有苯酚0.2g并用盐酸调节pH值为2.5的0.9％氯化钠溶液，使溶解成每1ml中含20单位的溶液，4～8℃贮存，以不超过5天为宜。
    标准品稀释液的制备 试验当日，精密量取标准品溶液适量，按高低剂量组（dS2、dS1）加0.9％氯化钠溶液（pH2.5）制成两种浓度的稀释液，高低剂量的比值（r）不得大于1：0.5。高浓度稀释液一般可制成每1ml中含0.06～0.12单位，调节剂量使低剂量能引起血糖明显下降，高剂量不致引起血糖过度降低，高低剂量间引起的血糖下降有明显差别。
    供试品溶液与稀释液的制备 按供试品的标示量或估计效价（AT），照标准品溶液与其稀释液的制备法制成高、低两种浓度的稀释液，其比值（r）应与标准品相等，供试品与标准品高低剂量所致的反应平均值应相近。
    测定法 取健康合格、同一来源、同一性别、出生日期相近的成年小鼠，体重相差不得超过3g，按体重随机等分成4组，每组不少于10只，逐只编号，各组小鼠分别自皮下注入一种浓度的标准品或供试品稀释液，每鼠0.2～0.3ml，但各鼠的注射体积（ml）应相等。注射后40分钟，按给药顺序分别自眼静脉丛采血，用适宜的方法，如葡萄糖氧化酶-过氧化酶法测定血糖值。第一次给药后间隔至少3小时，按双交叉设计，对每组的各鼠进行第二次给药，并测定给药后40分钟的血糖值。照生物检定统计法（通则1431）中量反应平行线测定双交叉设计法计算效价及实验误差。
    本法的可信限率（FL％）不得大于25％。