1207 玻璃酸酶测定法

1207 玻璃酸酶测定法
    试剂（1）醋酸-醋酸钾缓冲液 取醋酸钾14g，冰醋酸20.5ml，再加水稀释至1000ml。
    （2）磷酸盐缓冲液 取磷酸二氢钠2.5g、无水磷酸氢二钠1.0g与氯化钠8.2g，加水溶解至1000ml。
    （3）水解明胶 取明胶50g，加水1000ml，在121℃加热90分钟，然后冷冻干燥。
    （4）水解明胶稀释液 取磷酸盐缓冲液与水各250ml，加水解明胶330mg，摇匀，在0～4℃保存。如溶液不发生浑浊，可继续使用。
    （5）血清贮备液 取新鲜牛血清或冻干牛血清（先用水溶解并稀释至标示量体积）1份，加醋酸-醋酸钾缓冲液9份稀释，再以4mol/L盐酸溶液调节pH值至3.1，放置18～24小时后再用。在0～4℃保存，可应用30日。
    （6）血清溶液 血清贮备液中血清总固体（取牛血清适量，置装有洁净砂粒并在105℃干燥至恒重的坩埚中，置水浴上蒸干后，再在105℃干燥至恒重）在8％左右者，取1份，用醋酸-醋酸钾缓冲液3份稀释；血清总固体在5％左右者，取1份，用醋酸-醋酸钾缓冲液2份稀释临用时制备。
    （7）玻璃酸钾贮备液 取预先经五氧化二磷减压干燥48小时的玻璃酸钾，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液。在O℃以下保存，可应用30日。
    （8）玻璃酸钾溶液 取玻璃酸钾贮备液1份，用磷酸盐缓冲液1份稀释。临用时制备。
    标准品溶液的制备 精密称取玻璃酸酶标准品适量，加冷的水解明胶稀释液制成每1ml中含1.5单位的溶液。临用时制备。
    供试品溶液的制备 按供试品的标示量或估计效价精密称取供试品适量，加冷的水解明胶稀释液制成每1ml中含约1.5单位的溶液。临用时制备。
    标准曲线的制备 取大小相同的试管12支，按顺序加入标准品溶液0.00ml、0.10ml、0.20ml、0.30ml、0.40ml与0.50ml，各2支；再依次相应加入水解明胶稀释液0.50ml、0.40ml、0.30ml、0.20ml、0.10ml与0.00ml，每隔30秒顺序加入玻璃酸钾溶液0.50ml，使每一管的总体积为1.00ml，摇匀，置37℃±0.5℃水浴中；每管准确保温30分钟后，每间隔30秒钟顺序取出，立即顺序加入血清溶液4.0ml，摇匀，在室温放置30分钟，摇匀，在640mn的波长处测定吸光度；同时以磷酸盐缓冲液0.50ml代替玻璃酸钾溶液，加水解明胶稀释液0.50ml，摇匀，按上述方法自“置37℃±0.5℃的水浴中”起同法操作，作为空白。以吸光度为纵坐标，标准品溶液的效价（单位）为横坐标绘制标准曲线。
    测定法 取大小相同的试管6支，依次加供试品溶液0.20ml、0.30ml与0.40ml，各2支；再依次相应加入水解明胶稀释液0.30ml、0.20ml与0.10ml，照标准曲线的制备项下，自“每隔30秒钟顺序加入玻璃酸钾溶液0.50ml”起，依法测定，自标准曲线上查得效价（单位）后，分别除以供试品的重量（mg），算出6份供试品的平均数，即为玻璃酸酶的效价（单位）。