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0721 维生素A测定法

来源:四部   分类:通则   页码:94  
0721 维生素A测定法
本法是用紫外-可见分光光度法(通则0401)或高效液相色谱法(通则0512)测定维生素A及其制剂中维生素A的含量,以单位表示,每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344μg或全反式维生素A醇0.300μg。 测定应在半暗室中尽快进行。 第一法(紫外-可见分光光度法) 由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素A原料药中混有其他杂质,采用紫外-可见分光光度法测得的吸光度不是维生素A独有的吸收。在以下规定的条件下,非维生素A物质的无关吸收所引人的误差可以用校正公式校正,以便得到正确结果。 校正公式采用三点法,除其中一点是在吸收峰波长处测得外,其他两点分别在吸收峰两侧的波长处测定,因此仪器波长应准确,在测定前,应对仪器波长进行校正。 测定法 取供试品适量,精密称定,加环己烷溶解并定量稀释制成每1ml中含9~15单位的溶液,照紫外-可见分光光度法(通则0401),测定其吸收峰的波长,并在下表所列各波长处测定吸光度,计算各吸光度与波长328nm处吸光度的比值和波长328nm处的()值。 如果吸收峰波长在326~329nm之间,且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定的±0.02,可用下式计算含量:每lg供试品中含有的维生素A的单位=()(328nm)×1900 如果吸收波长在326~329nm之间,但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定值的±0.02,应按下式求出校正后的吸光度,然后再计算含量: 如果在328nm处的校正吸光度与未校正吸光度相差不超过±3.0%,则不用校正,仍以未经校正的吸光度计算含量。 如果校正吸光度与未校正吸光度相差在-15%至-3%之间,则以校正吸光度计算含量。 如果校正吸光度超出未校正吸光度的-15%至-3%的范围,或者吸收峰波长不在326~329nm之间,则供试品须按下述方法测定。 另精密称取供试品适量(约相当于维生素A总量500单位以上,重量不多于2g),置皂化瓶中,加乙醇30ml与50%氢氧化钾溶液3ml,置水浴中煮沸回流30分钟,冷却后,自冷凝管顶端加水10ml冲洗冷凝管内部管壁,将皂化液移至分液漏斗中(分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂),皂化瓶用水60~100ml分数次洗涤,洗液并入分液漏斗中,用不含过氧化物的乙醚振摇提取4次,毎次振摇约5分钟,第一次60ml,以后各次40ml,合并乙醚液,用水洗涤数次,每次约100ml,洗涤应缓缓旋动,避免乳化,直至水层遇酚酞指示液不再显红色,乙醚液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的滤器滤过,滤器用乙醚洗涤,洗液与乙醚液合并,置250ml量瓶中,用乙醚稀释至刻度,摇匀;精密量取适量,置蒸发皿内,微温挥去乙醚,迅速加异丙醇溶解并定量稀释制成每1ml中含维生素A9~15单位,照紫外-可见分光光度法(通则 0401),在 300nm、310nm、325nm与334nm 四个波长处测定吸光度,并测定吸收峰的波长。吸收峰的波长应在323~327nm之间,且300nm波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值应不超过0.73,按下式计算校正吸光度: 每lg供试品中含有的维生素A的单位=()(325nm,校正)×1830 如果校正吸光度在未校正吸光度的97%~103%之间,则仍以未经校正的吸光度计算含量。 如果吸收峰的波长不在323~327nm之间,或300nm波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值超过0.73, 则应自上述皂化后的乙醚提取液250ml中,另精密量取适量(相当于维生素A300~400单位),微温挥去乙醚至约剩5ml,再在氮气流下吹干,立即精密加入甲醇3ml,溶解后,采用维生素D测定法(通则0722)第二法项下的净化用色谱系统,精密量取溶解后溶液500μl,注入液相色谱仪,分离并准确收集含有维生素A的流出液,在氮气流下吹干,而后照上述方法自“迅速加异丙醇溶解”起,依法操作并计算含量。 第二法(高效液相色谱法) 本法适用于维生素A醋酸酯原料及其制剂中维生素A的含量测定。 色谱条件与系统适用性试验 用硅胶为填充剂;以正己烷-异丙醇(997:3)为流动相;检测波长为325nm。取系统适用性试验溶液10μl,注入液相色谱仪,调整色谱系统,维生素A醋酸酯峰与其顺式异构体峰的分离度应大于3.0。精密量取对照品溶液10μl,注入液相色谱仪,连续进样5次,主成分峰面积的相对标准偏差不得过3.0%。 系统适用性试验溶液的制备 取维生素A对照品适量(约相当于维生素A醋酸酯300mg),置烧杯中,加入碘试液0.2ml,混匀,放置约10分钟,定量转移至200ml量瓶中,用正己烷稀释至刻度,摇匀,精密量取1ml,置100ml量瓶中,用正己烷稀释至刻度,摇匀。 测定法 精密称取供试品适量(约相当于15mg维生素A醋酸酯),置100ml量瓶中,用正己烷稀释至刻度,摇匀, 精密量取5ml,置50ml量瓶中,用正己烷稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。另精密称取维生素A对照品适量,同法制成对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,按外标法以峰面积计算,即得。 【附注】 (1)甘油淀粉润滑剂 取甘油22g,加入可溶性淀粉9g,加热至140℃,保持30分钟并不断搅拌,放冷,即得。 (2)不含过氧化物的乙醚 照麻醉乙醚项下的过氧化物检查,如不符合规定,可用5%硫代硫酸钠溶液振摇,静置,分取乙醚层,再用水振摇洗涤1次,重蒸,弃去首尾5%部分,馏出的乙醚再检查过氧化物,应符合规定。 (3)若维生素A对照品中含有维生素A醋酸酯顺式异构体,则可直接以对照品溶液作为系统适用性溶液,不必再做破坏性实验。

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