注射用鼠神经生长因子

注射用鼠神经生长因子Zhusheyong Shu Shenjing ShengzhangyinziMouse Nerve Growth Factor for Injection
    本品系由健康小鼠颌下腺提取的生物，活性蛋白质，经分离、纯化后加入适宜稳定剂后冻干制成。不含防腐剂。
    1基本要求
    生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
    2制造
    2.1小鼠颌下腺来源及采集
    2.1.1采用体重为20g以上60~90日龄健康雄性小鼠，小鼠应符合清洁级动物相关要求（通则3602与通则3603）。
    2.1.2采用适宜方法处死小鼠，经局部消毒处理后摘取颌下腺，剔除其他组织后备用。如需存放应冻存于-20℃以下，并规定保存时间。
    2.2原液
    2.2.1提取
    采用适宜的方法将小鼠颌下腺破碎匀浆，离心取上清。
    2.2.1纯化
    采用经批准的方法进行纯化、病毒去除或灭活后即为鼠神经生长因子原液。
    2.2.3原液检定
    按3.1项进行。
    2.3半成品
    2.3.1配制
    按成品规格配制，并加入适宜稳定剂。
    2.3.2半成品检定
    按3.2项进行。
    2.4成品
    2.4.1分批
    应符合“生物制品分批规程”规定。
    2.4.2分装及冻干
    应符合“生物制品分装和冻干规程”及通则0102有关规定。
    2.4.3规格
    18μg（9000U）/瓶或20μg（9000U）/瓶，30μg（15000U）/瓶。
    2.4.4包装
    应符合“生物制品包装规程”及通则0102有关规定。
    2.5病毒去除和灭活
    生产过程中应采用经批准的方法去除和灭活病毒。如用灭活剂（如有机溶剂、去污剂）灭活病毒，则应规定对人安全的灭活剂残留量限值。
    3检定
    3.1原液检定
    3.1.1生物学活性
    依法测定（通则3530）。
    3.1.2蛋白质含量
    依法测定（通则0731第二法），应不低于0.1mg/ml。
    3.1.3比活性
    为生物学活性与蛋白质含量之比。每1mg蛋白质应不低于5.0×105 AU。[1]
    3.1.4纯度
    3.1.4.1电泳法
    依法测定（通则0541第五法）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg（考马斯亮蓝R250染色法）。经扫描仪扫描，纯度应不低于98.0%。
    3.1.4.2高效液相色谱法
    依法测定（通则0512）。色谱柱以适合分离分子质量为5~60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.25mol/L磷酸盐缓冲液（含0.15mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L磷酸二氢钠溶液）-乙腈（85：15）；上样量应不低于20μg，在波长280nm处检测，以鼠神经生长因子色谱峰计算的理论板数应不低于1000。按面积归一化法计算，鼠神经生长因子主峰面积应不低于总面积的95.0%。
    3.1.5分子量
    依法测定（通则0541第五法）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，供试品的分子质量应为11.0~15.0kD。
    3.1.6等电点
    主区带应为8.4~9.4，且供试品的等电点图谱应与对照品的一致（通则0541第六法）。
    3.1.7紫外光谱
    用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至100~50μg/ml，在光路1cm、波长230~360nm下进行扫描，最大吸收峰波长应为280nm±3nm（通则0401）。
    3.1.8细菌内毒素检查
    依法检查（通则1143），每1支应小于10EU。
    3.1.9磷酸三丁酯残留量
    如工艺中采用磷酸三丁酯，则每1ml中磷酸三丁酯应不大于10μg（通则3205）。
    3.1.10聚山梨酯80残留量
    如工艺中采用聚山梨酯80，则每1ml中聚山梨酯80应不大于100μg（通则3203）。
    3.1.11鼠源性病毒检查
    依法检查（通则3303），至少每半年一次，应无任何特定的鼠源性病毒。
    3.2半成品检定
    3.2.1细菌内毒素检查
    依法检查（通则1143），每1支应小于10EU。
    3.2.2无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.3成品检定
    除水分测定、裝量差异检查、不溶性微粒检查、生物学活性、含量测定外，应按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余各项检定。
    3.3.1鉴别试验
    按免疫印迹法（通则3401）或免疫斑点法（通则3402）测定，应为阳性。
    3.3.2物理检查
    3.3.2.1外观
    应为白色或类白色的疏松体或粉末，按标示量加入灭菌注射用水后迅速复溶为无色澄明液体。
    3.3.2.2可见异物
    依法检查（通则0904），应符合规定。
    3.3.2.3不溶性微粒检查
    依法检查（通则0903），应符合规定。
    3.3.2.4装量差异
    依法检查（通则0102），应符合规定。
    3.3.3化学检定
    3.3.3.1水分
    应不高于3.0%（通则0832第一法）。
    3.3.3.2 pH值
    应为6.0~7.4（通则0631）。
    3.3.3.3渗透压摩尔浓度
    依法测定（通则0632），应符合批准的要求。
    3.3.3.4辛酸钠含量
    如制品中加入辛酸钠，则每1支中辛酸钠应不大于0.1mmol（通则3111）。
    3.3.4生物学活性
    依法测定，应不低于标示量[2]（通则3530）。
    3.3.5含量测定
    采用ELISA或HPLC法，应为标示量的80%~120%。
    酶联免疫法按试剂盒说明书进行。
    采用高效液相色谱法（通则0512）。
    色谱条件：以适合分离分子质量为5~60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；以0.25mol/L磷酸盐缓冲液（含0.15mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L磷酸二氢钠溶液）-乙腈（85：15）为流相；检测波长为214nm。供试品溶液中鼠神经生长因子与人血白蛋白的分离度应符合要求。
    测定法：取供试品和标准品适量，用流动相分别稀释制成每1ml中含鼠神经生长因子50%的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录30分钟。标准品溶液、供试品溶液均进样3次，记录色谱图并计算峰面积。按外标法以峰面积计算供试品中鼠神经生长因子的含量。
    3.3.6无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.3.7细菌内毒素检查
    依法检查（通则1143），每1支应小于10EU。
    3.3.8异常毒性检查
    依法检查（通则1141小鼠试验法），应符合规定。
    3.3.9外源病毒污染检查
    采用动物病毒敏感细胞（如BHK21），每瓶（25cm2）培养细胞中加入供试品1ml，37℃培养7天为一代，连续盲传3代，细胞应生长良好，不应出现病毒感染引起的病变，判为合格。
    4保存、运输及有效期
    于2~8℃避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。
    5使用说明
    应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。