冻干甲型肝炎减毒活疫苗

冻干甲型肝炎减毒活疫苗Donggan Jiaxing Ganyan Jiandu HuoyimiaoHepatitis A (Live) Vaccine，Freeze-dried
    本品系用甲型肝炎（简称甲肝）病毒减毒株接种人二倍体细胞，经培养、收获、提取病毒后，加入适宜稳定剂冻干制成。用于预防甲型肝炎。
    1 基本要求
    生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
    2 制造
    2.1 生产用细胞
    生产用细胞为人二倍体细胞（2BS株、KMB17株或其他批准的细胞株）。
    2.1.1 细胞管理及检定
    应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。取自同批工作细胞库的1支或多支细胞，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。
    2BS株细胞种子代次应不超过第14代，主细胞库细胞代次应不超过第31代，工作细胞库细胞代次应不超过第44代；KMB17株细胞种子代次应不超过第6代，主细胞库细胞代次应不超过第15代，工作细胞库细胞代次应不超过第45代。
    2.1.2 细胞制备
    取工作细胞库中的1支或多支细胞，经复苏、胰蛋白酶消化、37℃±0.5℃静置或旋转培养制备的一定数量并用于接种病毒的细胞为一个细胞批。
    2.2 毒种
    2.2.1 名称及来源
    生产用毒种为甲肝病毒H2减毒株或L-A-1减毒株。
    2.2.2 种子批的建立
    应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。
    H2减毒株原始种子传代应不超过第7代，主种子批应不超过第8代，工作种子批应不超过第14代，生产的疫苗病毒代次应不超过第15代；L-A-1减毒株原始种子传代应不超过第22代，主种子批应不超过第25代，工作种子批应不超过第26代，生产的疫苗病毒代次应不超过第27代。
    2.2.3 种子批毒种的检定
    主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1～2.2.3.4项检定。
    2.2.3.1 鉴别试验
    用甲肝病毒特异性免疫血清及甲肝病毒抗体阴性血清分别与500～1000CCID50/ml甲肝病毒等量混合，置37℃水浴60分钟，接种人二倍体细胞，置35℃培养至病毒增殖高峰期，提取甲肝病毒后用酶联免疫法测定，经中和的病毒液检测结果应为阴性，证明甲肝病毒被完全中和；未经中和的病毒液检测结果应为阳性，证明为甲肝病毒。
    2.2.3.2 病毒滴定
    将毒种做10倍系列稀释，取至少3个稀释度，分别接种人二倍体细胞，置35℃培养至病毒增殖高峰期，收获后提取甲肝病毒，用酶联免疫法测定，病毒滴度应不低于6.50 lg CCID50/ml。
    2.2.3.3 无菌检查 
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    2.2.3.4 支原体检查 
    依法检查（通则3301），应符合规定。
    2.2.3.5 外源病毒因子检查 
    依法检查（通则3302），应符合规定。供试品可不经甲肝病毒特异性免疫血清中和，直接接种小鼠和细胞观察。
    2.2.3.6 免疫原性检查
    用主种子批毒种制备疫苗，按常规接种甲肝易感者至少40名，分别于免疫前及免疫后6～8周采血，血清抗体阳转率应不低于90%。
    2.2.3.7 猴体安全及免疫原性试验 
    用主种子批毒种制备疫苗进行猴体试验。取甲肝病毒抗体阴性、丙氨酸氨基转移酶指标正常、体重为1.5～4.5kg的健康恒河猴或红面猴5只，于下肢静脉注射1次人用剂量的疫苗，滴度应不低于6.50 lg CCID50/剂。试验猴于第0周、第4周、第8周肝穿刺做组织病理检查。于第0周、第2周、第3周、第4周、第6周、第8周采血测定丙氨酸氨基转移酶及甲肝病毒抗体。应设2只猴为阴性对照。
    试验组符合下列情况者判定合格：
    （1）至少4只猴抗体阳转；
    （2）血清丙氨酸氨基转移酶有一过性（1周次）升高者不超过2只猴；
    （3）肝组织无与接种供试品有关的病理改变。
    有下列情况之一者可重试：
    （1）接种猴抗体阳转率低于4/5；	
    （2）抗体阳转前后2周内血清丙氨酸氨基转移酶异常升高超过2次；
    （3）试验猴不能排除其他原因所致的肝组织病理改变。
    重试后仍出现上述情况之一者，判为不合格。
    2.2.4 毒种保存 
    毒种应于-60℃以下保存。
    2.3 原液
    2.3.1 细胞制备 
    按2.1.2 项进行。
    2.3.2 培养液
    培养液为含适量灭能新生牛血清的MEM或其他适宜培养液。新生牛血清的质量应符合规定（通则3604），且甲肝抗体检测应为阴性。
    2.3.3 对照细胞外源病毒因子检查 
    依法检查（通则3302），应符合规定。
    2.3.4 病毒接种和培养
    将毒种按0.05～1.0MOI接种细胞（同一工作种子批毒种应按同一MOI接种），于35℃±0.5℃培养，培养期间，根据细胞生长情况，可用不少于原倍培养液量的洗液洗涤去除牛血清，并换加维持液或其他适宜的液体继续培养。
    2.3.5 病毒收获物
    于病毒增殖高峰期，采用适宜浓度的胰蛋白酶或其他适宜方法消化含甲肝病毒的细胞，并经离心或其他适宜的方法收集含甲肝病毒的细胞为病毒收获物。检定合格的同一细胞批生产的同一次病毒收获物可合并为单次病毒收获物。
    2.3.6 病毒收获物检定 
    按3.1项进行。
    2.3.7 病毒收获物保存 
    于-20℃以下保存，保存时间按批准的执行。
    2.3.8 病毒提取
    检定合格的病毒收获物经冻融和（或）超声波处理后，用适宜浓度的三氯甲烷抽提以提取病毒。
    2.3.9 合并
    检定合格的同一细胞批生产的单次病毒收获液可合并为一批。
    2.3.10 原液检定 
    按3.2项进行。
    2.3.11 原液保存
    于2～8℃保存，保存时间按批准的执行。
    2.4 半成品
    2.4.1 配制
    将原液按规定的同一病毒滴度进行配制，并加入适宜稳定剂，即为半成品。
    2.4.2 半成品检定 
    按3.3项进行。
    2.5 成品
    2.5.1 分批
    应符合“生物制品分批规程”规定。
    2.5.2 分装及冻干
    应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
    2.5.3 规格
    按标示量复溶后每瓶0.5ml或1.0ml。每1次人用剂量为0.5ml或1.0ml，含甲型肝炎活病毒应不低于6.50 lg CCID50。
    2.5.4 包装
    应符合“生物制品包装规程”规定。
    3 检定
    3.1 病毒收获物检定
    3.1.1 病毒滴定
    按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于7.00 lg CCID50/ml。
    3.1.2 无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.1.3 支原体检查 
    依法检查（通则3301），应符合规定。
    3.2 原液检定
    3.2.1 病毒滴定
    按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于7.00 lg CCID50/ml。
    3.2.2 无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.2.3 支原体检查 
    依法检查（通则3301），应符合规定。
    3.3 半成品检定 
    无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.4 成品检定
    除水分测定外，应按标示量加入所附灭菌注射用水，复溶后进行以下各项检定。
    3.4.1 鉴别试验
    采用酶联免疫法进行检测，应证明含有甲肝病毒抗原。
    3.4.2 外观
    应为乳酪色疏松体，复溶后为澄明液体，无异物。
    3.4.3 水分
    应不高于3.0%（通则0832）。
    3.4.4 pH值
    依法检查（通则0631），应符合批准的要求。
    3.4.5 渗透压摩尔浓度 
    依法检查（通则0632），应符合批准的要求。
    3.4.6 三氯甲烷残留量 
    应不高于0.006%（通则0861）。
    3.4.7 病毒滴定
    取疫苗3～5瓶混合滴定，按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于6.50 lg CCID50/剂。
    3.4.8 热稳定性试验
    疫苗出厂前应进行热稳定性试验，应与病毒滴定同时进行。于37℃放置72小时后，按2.2.3.2项进行，病毒滴度应不低于6.50 lg CCID50/剂，病毒滴度下降应不高于0. 50 lg。
    3.4.9 牛血清白蛋白残留量 
    应不高于50ng/剂（通则3411）。
    3.4.10 抗生素残留量
    生产过程中加入抗生素的应进行该项检查。采用酶联免疫法检测，应不高于50ng/剂。
    3.4.11 无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.4.12 异常毒性检查
    依法检查（通则1141），应符合规定。
    3.4.13 细菌内毒素检查
    应不高于50EU/剂（通则1143凝胶限度试验）。
    4 疫苗稀释剂
    疫苗稀释剂为灭菌注射用水，稀释剂的生产应符合批准的要求。灭菌注射用水应符合本版药典（二部）的相关规定。
    5 保存、运输及有效期
    于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。
    6 使用说明
    应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。
    冻干甲型肝炎减毒活疫苗使用说明
    【药品名称】
    通用名称：冻干甲型肝炎减毒活疫苗
    英文名称：Hepatitis A （Live） Vaccine， Freeze-dried
    汉语拼音：Donggan Jiaxing Ganyan Jiandu Huoyimiao
    【成分和性状】 本品系用甲型肝炎病毒减毒株接种人二倍体细胞，经培养、收获病毒液、提取后，加适宜的稳定剂冻干制成。为乳酪色疏松体，复溶后为澄明液体。
    有效成分：甲型肝炎减毒活病毒。
    辅料：应列出全部批准的辅料成分。
    疫苗稀释剂：灭菌注射用水。
    【接种对象】 
    1岁半以上的甲型肝炎易感者。
    【作用与用途】 接种本疫苗后，可刺激机体产生抗甲型肝炎病毒的免疫力。用于预防甲型肝炎。
    【规格】 复溶后每瓶0.5ml或1.0ml。每1次人用剂量为0.5ml或1.0ml，含甲型肝炎活病毒应不低于6.50 lg CCID50。
    【免疫程序和剂量】 （1）按标示量加入所附灭菌注射用水，待疫苗复溶并摇匀后使用。
    （2）于上臂外侧三角肌附着处皮下注射1剂。
    【不良反应】
    常见不良反应：
    （1）一般接种疫苗后24小时内，注射部位可出现疼痛和触痛，多数情况下于2～3天内自行消失。
    （2）—般接种疫苗后1～2周内，可能出现一过性发热反应。其中大多数为轻度发热反应，一般持续1～2天后可自行缓解，不需处理，必要时适当休息，多喝开水，注意保暖，防止继发感染；对于中度发热反应或发热时间一般超过48小时者，可采用物理方法或药物对症处理。
    （3）接种疫苗后，偶有皮疹出现，不需特殊处理，必要时可对症治疗。
    罕见不良反应：
    重度发热反应：应采用物理方法及药物对症处理，以防高热惊厥。
    极罕见不良反应：
    （1）过敏性休克：一般接种疫苗后1小时内发生。应及时注射肾上腺素等抢救措施进行治疗。
    （2）过敏性皮疹：一般接种疫苗后72小时内出现荨麻疹，出现反应时，应及时就诊，给予抗过敏治疗。
    （3）过敏性紫癜：出现过敏性紫癜反应时应及时就诊，应用皮质固醇类药物给予抗过敏治疗，治疗不当或不及时有可能并发紫癜性肾炎。
    【禁忌】 （1）已知对该疫苗所含的任何成分，包括辅料以及抗生素过敏者。
    （2）妊娠期妇女。
    （3）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期、发热者。
    （4）免疫缺陷、免疫功能低下或正在接受免疫抑制剂治疗者。
    （5）患未控制的癲痫和其他进行性神经系统疾病者。 
    【注意事项】 （1）有以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者、哺乳期妇女。
    （2）疫苗瓶有裂纹、标签不清或失效者、疫苗复溶后出现浑浊等外观异常者均不得使用。
    （3）开启疫苗瓶和注射时，切勿使消毒剂接触疫苗。
    （4）疫苗瓶开启后应立即使用。
    （5）应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。
    （6）注射人免疫球蛋白者应至少间隔3个月以上接种本疫苗，以免影响免疫效果。
    （7）使用其他减毒活疫苗与接种本疫苗应至少间隔1个月以上，以免影响免疫效果。
    （8）本品为减毒活疫苗，一般不推荐在该病流行季节使用。
    （9）育龄期妇女注射本疫苗后，应至少3个月内避免怀孕。
    （10）严禁冻结。
    【贮藏】 于2～8℃避光保存和运输。
    【包装】 按批准的执行。
    【有效期】按批准的执行。
    【执行标准】
    【批准文号】
    【生产企业】
    企业名称：
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