皮上划痕用鼠疫活疫苗

皮上划痕用鼠疫活疫苗Pishang Huahenyong Shuyi HuoyimiaoPlague Vaccine (Live) for Percutaneous Scarification
    本品系用鼠疫杆菌的弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。用于预防鼠疫。
    1 基本要求
    生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
    2 制造
    2.1 菌种
    生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
    2.1.1 名称及来源
    采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株。
    2.1.2 种子批的建立
    应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
    2.1.3 种子批的传代
    工作种子批菌种启开至疫苗生产，传代应不超过3代。
    2.1.4 种子批的检定
    2.1.4.1 培养特性
    在琼脂平皿上，35～37℃培养44～48小时之菌落应为粗糙型，在肉汤培养基的液面有薄菌膜，管底有沉淀物，肉汤透明。
    2.1.4.2 染色镜检
    应为革兰氏阴性杆菌。
    2.1.4.3 生化反应
    发酵葡萄糖，产酸不产气；石蕊牛乳轻度变红；在甘油培养基内不产酸不产气（通则3605）。
    2.1.4.4 噬菌体裂解试验
    将EV菌种涂于琼脂平皿上，加入106以上的鼠疫噬菌体1滴，于28℃培养44～48小时，噬菌体流过处应无本菌生长。
    2.1.4.5 特异性毒性试验
    选用体重300～400g豚鼠3只，每只皮下注射含菌1.2×1010（于28～30℃培养44～48小时）的培养物。在注射后第6天解剖1只，第21天解剖2只。肉眼检查注射部位、脾、肝和肺，并用脾、肝、肺及心血进行培养，其中心血和肺经培养应无本菌生长。肉眼检查病变，注射部位可见充血，浸润变为脓疡，肝和脾可有丘疹状结节，肺部不应有鼠疫特异病变为合格。肺部如有显著病变时，应用同数量豚鼠复试，若仍有显著病变时，菌种应废弃。
    2.1.4.6 免疫力试验
    选用体重200～250g的豚鼠10只，每只皮下注射含菌7.0×105（于28～30℃培养44～48小时）的培养物，于20～25天后进行攻击，每只皮下感染鼠疫强毒菌200MLD。同时用3组豚鼠作对照，每组3只，各组豚鼠分别皮下注射0.5MLD、1MLD及2MLD的毒菌。免疫组及对照组至少观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，免疫力试验为合格。
    2.1.5 种子批的保存
    种子批应冻干保存于8℃以下。
    2.2 原液
    2.2.1 生产用种子
    2.2.1.1 第1代菌种
    将工作种子批菌种启开后，接种于厚金格尔琼脂培养基上，于28～30℃培养44～48小时为第1代，置2～8℃保存可使用15天。
    2.2.1.2 第2代菌种
    用生理氯化钠溶液将第1代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于28～30℃培养44～48小时为第2代，培养物经纯菌检查合格后，弃去凝固水，用无菌生理氯化钠溶液制成菌悬液。由此制备适宜数量的生产用种子。
    2.2.1.3 第3代菌种
    在第2代菌种不够的情况下，用生理氯化钠溶液将第2代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于28～30℃培养44～48小时为第3代，培养物经纯菌检查合格后，弃去凝固水，用无菌生理氯化钠溶液制成菌悬液。由此制备适宜数量的生产用种子。
    2.2.2 生产用培养基
    采用厚金格尔琼脂培养基（pH6.8～7.2）或经批准的其他培养基。
    2.2.3 接种和培养
    将第2代或第3代生产用种子接种在生产用培养基上，于28～30℃培养44～48小时后，逐瓶检查，有杂菌者废弃。
    2.2.4 收获
    用由蔗糖、明胶、硫脲、谷氨酸钠及尿素组成的稳定剂洗下菌苔（洗菌前弃去凝固水）或将菌苔刮入上述稳定剂内即为收获液，收获液进行纯菌检查，合格者合并制成原液。收获液和原液置2～8℃保存。
    2.2.5 原液检定
    按3.1项进行。
    2.3 半成品
    2.3.1 配制
    根据3.1.2项测定的原液浓度，用稳定剂稀释至每1ml含菌 1.6×1010。
    2.3.2 半成品检定
    按3.2项进行。
    2.4 成品 
    2.4.1 分批
    应符合“生物制品分批规程”规定。
    2.4.2 分装与冻干
    应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装后应立即冻干，可真空封口，亦可充氮封口。
    2.4.3 规格
    按标示量复溶后每瓶0.5ml（10次人用剂量），含菌 8.0×109；按标示量复溶后每瓶1.0ml（20次人用剂量），含1.6×1010。每1次人用剂量含活菌数应不低于2.0×108。
    2.4.4 包装
    应符合“生物制品包装规程”规定。
    3 检定 
    3.1 原液检定
    3.1.1 纯菌检查
    按通则1101方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫EV菌株特征，不得有杂菌。
    3.1.2 浓度测定
    用国家药品检定机构分发的浓度测定用参考品，以分光光度法或其他方法测定浓度。
    3.2 半成品检定 
    纯菌检查 
    按3.1.1项进行。
    3.3 成品检定
    除装量差异和水分测定外，按标示量加入氯化钠注射液复溶后，进行其余各项检定。
    3.3.1 鉴别试验 
    按2.1.4.4项进行。
    3.3.2 物理检查
    3.3.2.1 外观
    应为白色或淡黄色疏松体，按标示量加入生理氯化钠溶液后，应在半分钟内复溶，并呈均匀悬液。
    3.3.2.2 装量差异 
    依法检查（通则0102），应符合规定。
    3.3.3 水分
    应不高于3.0% （通则0832）。
    3.3.4 纯菌检查
    3.3.4.1 按3.1.1项进行。
    3.3.4.2 噬菌体裂解试验
    取一支待检疫苗，加入0.5ml生理盐水复溶，取复溶菌液120μl与120μl鼠疫噬菌体在1.5mlEP管中混合，接种2个营养琼脂培养基平皿，每个平皿接种100μl。用 L型玻璃棒均匀涂抹后分别置20～25℃、30～35℃培养观察44～48小时，无杂菌生长判为合格。
    3.3.5 菌落和菌形检查
    应呈典型粗糙型菌落，涂片染色镜检，为革兰氏阴性杆菌。
    3.3.6 浓度测定
    用国家药品检定机构分发的浓度测定用参考品，以分光光度法测定，每1次人用剂量含菌数不高于9.5×108。
    3.3.7 活菌数测定
    取本品3瓶，混匀并稀释至菌数为1.0×103/ml，接种5个平皿，每个平皿接种0.1ml。均匀涂抹后置28～30℃培养2～3天。每1次人用剂量含活菌数应不低于2.0×108。
    3.3.8 效力测定
    取每5批疫苗中的首批进行效力测定。用体重250～300g豚鼠10只，每只皮下注射含菌5.0×107，注射后20～25天以200MLD的鼠疫毒菌进行皮下攻击。同时有3组豚鼠作对照，每组3只，分别于各组豚鼠皮下注射0.5MLD、1MLD和2MLD。各组动物于注射后，观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照组动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，效力测定为合格。
    3.3.9 特异性毒性检查
    取体重250～350g豚鼠2只，每只皮下注射含菌1.2×1010的本品，第6天称体重，体重减轻应不超过20%，并取其中1只解剖，另1只观察到21天解剖。检查项目及要求同2.1.4.5项。
    4 稀释剂
    稀释剂为氯化钠注射液，稀释剂的生产应符合批准的要求，氯化钠注射液应符合本版药典（二部）的相关规定。
    5 保存、运输及有效期
    于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，有效期为12个月。
    6 使用说明
    应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。
    皮上划痕用鼠疫活疫苗使用说明
    【药品名称】
    通用名称：皮上划痕用鼠疫活疫苗
    英文名称：Plague Vaccine （Live） for Percutaneous Scarification
    汉语拼音：Pishang Huahenyong Shuyi Huoyimiao
    【成分和性状】 本品系用鼠疫杆菌弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。为白色或淡黄色疏松体，复溶后为均匀悬液。
    有效成分：鼠疫弱毒株活菌体。
    辅料：应列出全部批准的辅料成分。
    疫苗稀释剂：氯化钠注射液。
    【接种对象】 疫区或通过疫区的人员。
    【作用与用途】 接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防鼠疫。
    【规格】 按标示量复溶后每瓶0.5ml （10次人用剂量），含菌8.0×109；按标示量复溶后每瓶1.0ml（20次人用剂量），含菌1.6×1010。每1次人用剂量活菌数不低于2.0×108。
    【免疫程序和剂量】 （1）按标示量加入氯化钠注射液溶解。每瓶20次人用剂量者加入1.0ml，10次人用剂量者加入0.5ml，复溶后的疫苗应在1小时内用完。
    （2）在上臂外侧三角肌上部附着处皮上划痕接种。在接种部位上滴加疫苗，每1次人用剂量0.05ml。用消毒针划成“井”字，划痕长度约1～1.5cm，应以划破表皮稍见血迹为宜。划痕处用针涂压10余次，使菌液充分进入划痕内。接种后局部应裸露至少5分钟。
    （3）14周岁以下儿童，疫苗滴于两处划2个“井” 字，14周岁以上者疫苗滴于三处划3个“井”字。“井” 字间隔2～3cm。
    （4）接种人员每年应免疫1次。
    【不良反应】
    常见不良反应：
    （1）接种后24小时内，在注射部位可出现疼痛和触痛，注射局部红肿浸润轻、中度反应，多数情况2～3天内自行消失。
    （2）接种疫苗后可出现一过性发热反应。其中大多数为轻度发热反应，持续1～2天后可自行缓解，一般不需处理；对于中度发热反应或发热时间超过48小时者，可给予对症处理。
    罕见不良反应：
    严重发热反应，应给予对症处理，以防高热惊厥。
    极罕见不良反应：
    淋巴结肿大，血管神经性水肿。
    【禁忌】 （1）已知对该疫苗的任何成分过敏者。
    （2）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。
    （3）免疫缺陷、免疫功能低下或正在接受免疫抑制治疗者。
    （4）妊娠期或6个月内的哺乳期妇女。
    【注意事项】 （1）本品仅供皮上划痕用，严禁注射！
    （2）以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癲痫史者、过敏体质者、6个月以上的哺乳期妇女。
    （3）疫苗瓶有裂纹、标签不清或失效者、疫苗复溶后外观异常者均不得使用.
    （4）疫苗开启后应立即使用，如需放置，应置2～8℃，并于1小时内用完，剩余均应废弃。
    （5）应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。
    （6）注射免疫球蛋白者，应至少间隔1个月以上接种本品，以免影响免疫效果。
    （7）开启疫苗瓶和接种时，切勿使消毒剂接触疫苗。
    （8）消毒皮肤只可用酒精，不可用碘酒，并在酒精挥发后再行接种。
    （9）本品与抗生素同时应用时可能影响疫苗的免疫效果。
    （10）本品为减毒活疫苗，不推荐在该疾病流行季节使用。
    【贮藏】 于2～8℃避光保存和运输。
    【包装】 按批准的执行。
    【有效期】 12个月。
    【执行标准】
    【批准文号】
    【生产企业】
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