吸附无细胞百白破联合疫苗

吸附无细胞百白破联合疫苗Xifu Wuxibao Bai Bai Po Lianhe YimiaoDiphtheria，Tetanus and Acellular Pertussis Combined Vaccine，Adsorbed
    本品系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加入氢氧化铝佐剂制成。用于预防百日咳、白喉、破伤风。
    1 基本要求
    生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
    2 制造
    2.1 混合前单价原液
    2.1.1 无细胞百日咳疫苗原液制造应符合本品种附录的规定。
    2.1.2 白喉类毒素原液制造应符合“吸附白喉疫苗”中2.1～2.2 项的规定。
    2.1.3 破伤风类毒素原液制造应符合“吸附破伤风疫苗”中2.1～2.2项的规定。
    2.1.4 原液检定
    2.1.4.1 百日咳疫苗原液检定
    按本品种附录中2项进行。
    2.1.4.2 白喉类毒素原液检定 
    按“吸附白喉疫苗”中3.1项进行。
    2.1.4.3 破伤风类毒素原液检定 
    按“吸附破伤风疫苗”中3.1项进行。
    2.2 半成品
    2.2.1 佐剂配制
    2.2.1.1 配制氢氧化铝，可用三氯化铝加氨水法或三氯化铝加氢氧化钠法。用氨水配制者需透析除氨后使用，也可用其他适宜方法配制。
    2.2.1.2 配制成的氢氧化铝原液应为浅蓝色或乳白色的胶体悬液，不应含有凝块或异物。
    2.2.1.3 氢氧化铝原液应取样测定氢氧化铝及氯化钠含量。
    2.2.2 合并及稀释
    将白喉类毒素、破伤风类毒素及无细胞百日咳疫苗原液加入已稀释的佐剂内，调pH值至5.8～7.2，使每1ml半成品含无细胞百日咳疫苗原液应不高于18μgPN； 白喉类毒素应不高于25Lf；破伤风类毒素应不高于7Lf。
    2.2.3 半成品检定 
    按3.1项进行。
    2.3 成品
    2.3.1 分批
    应符合“生物制品分批规程”规定。
    2.3.2 分装
    应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
    2.3.3 规格
    每瓶0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml。每1次人用剂量0.5ml，含无细胞百日咳疫苗效价应不低于4.0IU，白喉疫苗效价应不低于30IU，破伤风疫苗效价应不低于40IU。
    2.3.4 包装
    应符合“生物制品包装规程”规定。
    3 检定
    3.1 半成品检定 
    无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.2 成品检定
    3.2.1 鉴别试验
    3.2.1.1 无细胞百日咳疫苗 
    可选择下列一种方法进行：（1）疫苗注射动物应产生抗体（按3.2.4.1项进行）；（2）采用酶联免疫法检测PT、FHA抗原，应含有相应抗原（通则3417）；（3）其他适宜的抗原抗体反应试验。
    3.2.1.2 白喉类毒素
    可选择下列一种方法进行：（1）疫苗注射动物应产生抗体（通则3505）；（2）疫苗加枸橼酸钠或碳酸钠将佐剂溶解后，做絮状试验（通则3506），应出现絮状反应；（3）疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清液，做凝胶免疫沉淀试验（通则3403），应出现免疫沉淀反应。
    3.2.1.3 破伤风类毒素
    可选择下列一种方法进行：（1）疫苗注射动物后应产生破伤风抗体（通则3504）；（2）疫苗加入枸橼酸钠或碳酸钠将吸附剂溶解后做絮状试验（通则3506），应出现絮状反应；（3）疫苗经解聚液溶解佐剂后取上清液，做凝胶免疫沉淀试验（通则3403），出现免疫沉淀反应。
    3.2.2 物理检查
    3.2.2.1 外观
    振摇后应呈均匀乳白色混悬液，无摇不散的凝块或异物。
    3.2.2.2 装量
    依法检查（通则0102），应不低于标示量。
    3.2.2.3 渗透压摩尔浓度 
    依法测定（通则0632），应符合批准的要求。
    3.2.3 化学检定
    3.2.3.1 pH值
    应为5.8～7.2（通则0631）。
    3.2.3.2 氢氧化铝含量
    应为1.0～1.5mg/ml（通则3106）。
    3.2.3.3 硫柳汞含量 
    应不高于0.1g/L（通则3115）。
    3.2.3.4 游离甲醛含量 
    应不高于0.2g/L（通则3207第一法）。
    3.2.3.5 戊二醛含量
    应小于0.01g/L（通则3204）。
    3.2.4 效价测定
    3.2.4.1 无细胞百日咳疫苗
    按“吸附百白破联合疫苗”中附录2进行。以适宜的稀释倍数稀释至第一个免疫剂量，再按5倍系列稀释。免疫时间为21天。每1次人用剂量的免疫效价应不低于4.0IU，且95%可信限的低限应不低于2.0IU。如达不到上述要求时可进行复试，但所有的有效试验结果必须以几何平均值（如用概率分析法时，应用加权几何平均）来计算。达到上述要求即判为合格。
    3.2.4.2 白喉疫苗
    每1次人用剂量中白喉类毒素的免疫效价应不低于30IU（通则3505）。
    3.2.4.3 破伤风疫苗
    每1次人用剂量中破伤风类毒素的免疫效价应不低于40IU（通则3504）。
    3.2.5 无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.2.6 特异性毒性检查
    3.2.6.1 无细胞百日咳疫苗
    按本品种附录中2.5项进行。
    3.2.6.2 白喉、破伤风疫苗
    用体重250～350g豚鼠，每批制品不少于4只，每只腹部皮下注射2.5ml，分两侧注射，每侧1.25ml，观察30天。注射部位可有浸润，经5～10天变成硬结，可能30天不完全吸收。在第10天、第20天、第30天称体重，到期体重比注射前增加，局部无化脓、无坏死、无破伤风症状及无晚期麻痹症者为合格。
    3.2.7 毒性逆转试验
    每批供试品置37℃4周，按本品种附录中2.6项进行。
    3.2.8 细菌内毒素检查
    依法检查（通则1143），应符合批准的要求。
    4 保存、运输及有效期
    于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，有效期为24个月；自百日咳原液脱毒之日起，疫苗总有效期不得超过36个月。
    5 附录
    无细胞百日咳疫苗原液制造及检定要求 
    6 使用说明
    应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。
    附录 无细胞百日咳疫苗原液制造及检定要求
    本品系由百日咳杆菌的培养物或其上清液，经硫酸铵盐析和蔗糖密度梯度离心法提取百日咳毒素（PT）和丝状血凝素（FHA）等有效组分，经脱毒制成。用于制备吸附无细胞百白破联合疫苗。
    1 制造
    1.1 菌种
    生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
    1.1.1 名称及来源
    生产用菌种应采用百日咳Ⅰ相 CMCC 58003（CS株）或其他适宜菌株。
    1.1.2 种子批的建立
    应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。
    1.1.3 种子批的传代
    工作种子批菌种启开后传代不应超过10代用于生产。
    1.1.4 种子批的检定
    1.1.4.1 培养特性
    于包-姜（Bordet-Gengou）培养基或其他适宜培养基上培养，各菌株应具有典型的形态，葡萄糖、尿素酶、硝酸盐、枸橼酸盐、半固体（动力）营养琼脂结果均应为阴性。
    1.1.4.2 血清学试验
    取经35～37℃培养40～48小时的菌苔，混悬于生理氯化钠溶液或PBS内，制成适宜浓度的菌悬液，与Ⅰ相参考血清做定量凝集反应，凝集效价应达到血清原效价之半。并同时进行Fim2、Fim3的血清学检测，应为阳性。
    1.1.4.3 皮肤坏死试验
    取经35～37℃培养40～48小时的菌苔，混悬于PBS内，并稀释成不同浓度的菌液；取家兔或豚鼠至少2只，分别用每一稀释度的菌液皮内注射0.1ml，经72小时观察注射部位的皮肤反应，如其中1只家兔或豚鼠在注射含菌4.0×107以下稀释度的部位出现出血性坏死者，为阳性反应，判为合格。
    1.1.4.4 毒力试验
    用体重16～18g的小鼠至少3组，每组至少10只，在麻醉状态下从鼻腔滴入经培养20～24小时、以PBS稀释的菌液0.05ml，观察14天，记录小鼠生死情况，按Reed-Muench法计算LD50，1LD50的菌数应不高于1.2×108。
    1.1.4.5 效价测定
    按“吸附百白破联合疫苗”附录2进行。
    1.1.5 菌种保存
    种子批应冻干保存于8℃以下。
    1.2 原液
    1.2.1 生产用种子
    将工作种子批菌种启开后，接种于改良包-姜培养基或活性炭半综合培养基或其他适宜培养基上，于35～37℃培养不超过72小时，以后各代不超过48小时。传代菌种保存不得超过14天，工作种子批启开后用于生产时不应超过10代。
    1.2.2 生产用培养基
    应选用S-S（Stainer-Scholte）培养基或其他适宜培养基。
    1.2.3 培养
    可采用静置培养法或发酵罐培养法，培养过程应取样做纯菌检查。
    1.2.4 收获和杀菌
    培养物于对数生长期后期或静止期前期收获。在培养物中加入硫柳汞杀菌。
    1.2.5 纯化
    采用硫酸铵盐析和蔗糖密度梯度离心去除内毒素，收集PT、FHA有效组分。
    1.2.6 蛋白氮含量测定
    依法测定（通则0731第二法）。
    1.2.7 纯度测定
    采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法或SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，应显示主要含有PT和FHA两种组分，且批间比例应保持一致。PT和FHA等有效组分应不低于总蛋白质含量的85%。
    1.2.8 脱毒和匀化
    采用甲醛溶液或戊二醛溶液脱毒，然后用适宜方法除去脱毒剂，再经超声波匀化处理即为原液。
    2 检定
    2.1 染色镜检
    取供试品的沉淀物，涂片染色镜检，不应有百日咳杆菌和其他细菌。
    2.2 效价测定
    按“吸附百白破联合疫苗”附录2进行。即先将原液稀释至成品的浓度后，以适宜的稀释倍数为第一个免疫剂量，再按5倍系列稀释，免疫21天后攻击。
    2.3 无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    2.4 不耐热毒素试验
    用生理氯化钠溶液将供试品稀释至半成品浓度的2倍，用48～72小时龄的乳鼠至少4只，每只皮内注射0.025ml，或用体重2.5kg的家兔至少2只，每只皮内注射0.1ml，观察4日，受试动物不得出现不耐热毒素引起的任何局部反应。
    2.5 特异性毒性检查
    毒性参考品按照每批标示进行稀释，将供试品稀释至与成品相同浓度。用体重14～16g NIH小鼠（雌性或雌雄各半），毒性参考品的每一稀释度和供试品各用一组，每组至少10只。每只小鼠腹腔注射0.5ml，分别进行2.5.1～2.5.3项试验。
    2.5.1 小鼠白细胞增多试验
    于注射后3天分别取小鼠末梢血进行白细胞计数。试验结果经统计学方法处理后，注射供试品的小鼠白细胞增多毒性的活性应不高于0.5LPU/ml。
    2.5.2 小鼠组胺致敏试验
    于注射后4天，每只小鼠腹腔注射0.5ml溶液（含二盐酸组胺4mg或二磷酸组胺2mg），30分钟后分别测小鼠肛温。试验结果经统计学方法处理后，供试品的小鼠组胺致敏毒性的活性应不高于0.8HSU/ml，且无动物死亡。
    2.6 毒性逆转试验
    每批供试品置37℃4周，然后按2.5.2项进行试验。
    2.7 热原检查
    用生理氯化钠溶液将供试品稀释成半成品浓度的1/50，依法检查（通则1142），注射剂量按家兔体重每1kg注射1ml，应符合规定。
    3 保存、运输及有效期
    于2～8℃避光保存和运输。原液自脱毒之日起，疫苗总有效期为36个月。
    吸附无细胞百白破联合疫苗使用说明
    【药品名称】
    通用名称：吸附无细胞百白破联合疫苗
    英文名称：Diphtheria，Tetanus and Acellular Pertussis Combined Vaccine，Adsorbed
    汉语拼音：Xifu Wuxibao Bai Bai Po Lianhe Yimiao
    【成分和性状】 本品系由无细胞百日咳疫苗原液、白喉类毒素原液及破伤风类毒素原液加氢氧化铝佐剂制成。为乳白色悬液，放置后佐剂下沉，摇动后即成均匀悬液，含防腐剂。
    有效成分：百日咳杆菌有效组分、白喉类毒素及破伤风类毒素。
    辅料：应列出全部批准的辅料成分。
    【接种对象】 3个月～6周岁儿童。
    【作用与用途】 接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防百日咳、白喉、破伤风。
    【规格】每瓶0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml。每1次人用剂量0.5ml，含无细胞百日咳疫苗效价不低于4.0IU，白喉疫苗效价不低于30IU，破伤风疫苗效价不低于40IU。
    【免疫程序和剂量】 （1）臀部或上臂外侧三角肌肌内注射。
    （2）基础免疫：共3针，自3月龄开始至12月龄，每针间隔4～6周，每次注射0.5ml。
    加强免疫通常在基础免疫后18～24月龄内进行，注射剂量为0.5ml。
    【不良反应】
    常见不良反应：
    （1）注射部位可出现红肿、疼痛、瘙痒。
    （2）全身性反应可有低热、哭闹等，一般不需处理即可自行缓解。
    罕见不良反应：
    （1）烦躁、厌食、呕吐、精神不振等。
    （2）重度发热反应：应给予对症处理，以防高热惊厥。
    （3）局部硬结，1～2个月即可吸收。严重者可伴有淋巴管或淋巴结炎，应及时就诊。
    极罕见不良反应：
    （1）局部无菌性化脓：一般需反复抽出脓液，严重时（破溃）扩创清除坏死组织，病程较长，最后可吸收愈合。
    （2）过敏性皮疹：一般在接种疫苗后72小时内出现荨麻疹，应及时就诊，给予抗过敏治疗。
    （3）过敏性休克：一般在注射疫苗后1小时内发生。应及时抢救，注射贤上腺素进行治疗。
    （4）过敏性紫癜：出现过敏性紫癜反应时应及时就诊，应用皮质固醇类药物给予抗过敏治疗，治疗不当或不及时有可能并发紫癜性肾炎。
    （5）血管神经性水肿。
    （6）神经系统反应，临床表现为抽搐、痉挛、惊厥、嗜睡及异常哭叫等症状，神经炎及神经根炎，变态反应性脑脊髄膜炎。
    【禁忌】 
    （1）已知对该疫苗的任何成分过敏者。
    （2）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。
    （3）患脑病、未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。
    （4）注射百日咳、白喉、破伤风疫苗后发生神经系统反应者。
    【注意事项】 
    （1）以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癲痫史者、过敏体质者。
    （2）使用时应充分摇匀，如出现摇不散的凝块、异物、疫苗瓶有裂纹或标签不清者，均不得使用。
    （3）疫苗开启后应立即使用，如需放置，应置2～8℃，并于1小时内用完，剩余均应废弃。
    （4）注射后局部可能有硬结，1～2个月即可吸收。注射第2针时应换另侧部位。
    （5）应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。
    （6）注射第1针后出现高热、惊厥等异常情况者，不再注射第2针。
    （7）严禁冻结。
    【贮藏】 于2～8℃避光保存和运输。
    【包装】 按批准的执行。
    【有效期】 24个月。
    【执行标准】
    【批准文号】
    【生产企业】
    企业名称：
    生产地址：
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    电话号码：
    传真号码：
    网址：