伤寒Vi多糖疫苗

伤寒Vi多糖疫苗Shanghan Vi Duotang YimiaoVi Polysaccharide Typhoid Vaccine
    本品系用伤寒沙门菌培养液纯化的Vi多糖，经用PBS稀释制成。用于预防伤寒。
    1 基本要求
    生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
    2 制造 
    2.1 菌种
    生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
    2.1.1 名称及来源
    生产用菌种为伤寒沙门菌Ty2株，CMCC 50098。
    2.1.2 种子批的建立
    应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
    2.1.3 种子批的传代
    主种子批启开后传代次数不得超过5代。工作种子批启开后至接种发酵罐培养传代次数不得超过5代。
    2.1.4 种子批的检定 
    2.1.4.1 培养特性
    菌种接种于pH7.2～7.4的肉汤琼脂、马丁琼脂或其他适宜的培养基35～37℃培养16～20小时，应为无色半透明、边缘整齐、表面光滑湿润的圆形菌落。
    2.1.4.2 染色镜检 
    应为革兰氏阴性杆菌。
    2.1.4.3 生化反应
    发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇均产酸不产气；不发酵乳糖、蔗糖（通则3605）；氧化酶试验阴性。
    2.1.4.4 血清学试验
    （1）玻片凝集试验
    菌种的新鲜培养物与Vi及H-d参考血清有强凝集反应（+++以上），与Ο-9参考血清不产生凝集或仅有较弱凝集反应。
    （2）定量凝集试验
    菌种的新鲜培养物，用PBS制成6.0×108/ml的菌悬液，加入终浓度为0.5%的甲醛溶液，杀菌后的菌液（或直接用活菌菌液），与伤寒Vi参考血清做定量凝集试验；另取经100℃30分钟加热杀菌的菌液，与伤寒Ο参考血清做定量凝集试验。出现（+）凝集之血清最高稀释度为凝集反应效价，凝集效价应不低于参考血清原效价之半。
    2.1.5 种子批的保存 
    种子批应冻干保存于8℃以下。
    2.2 原液
    2.2.1 生产用种子
    启开工作种子批菌种，检定培养特性及染色镜检合格后，接种于改良半综合培养基或其他适宜培养基，制备数量适宜的生产用种子。
    2.2.2 生产用培养基
    采用改良半综合培养基或经批准的其他培养基。培养基不应含有与十六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成分。
    2.2.3 培养
    采用培养罐液体培养。在培养过程中及杀菌前取样进行菌液浓度测定及纯菌检查，涂片做革兰氏染色镜检，如发现污染杂菌，应废弃。
    2.2.4 收获及杀菌
    培养物于对数生长期的后期或静止期的前期收获。取样进行菌液浓度测定及纯菌检查，合格后在收获的培养液中加入甲醛溶液杀菌，杀菌条件以确保杀菌完全又不损伤其多糖抗原为宜。
    2.2.5 纯化
    2.2，5.1 去核酸
    将已杀菌的培养液离心后收集上清液，加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀，形成沉淀；离心后的沉淀物用注射用水溶解，并加入适量氯化钠（或氯化钙）溶液，使多糖与十六烷基三甲基溴化铵解离；加入乙醇至最终浓度为25%，2～8℃静置1～3小时或过夜，离心收集澄清的上清液。
    2.2.5.2 沉淀多糖
    于上述上清液中加入乙醇至最终浓度为80%，充分振摇，离心收集沉淀；沉淀物用无水乙醇及丙酮分别洗涤，沉淀物即为多糖粗制品。多糖粗制品应保存在-20℃以下，待纯化。
    2.2.5.3 多糖纯化
    将多糖粗制品溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，稀释至适宜浓度，按适当比例用冷苯酚提取数次，离心收集上清液，并用0.1mol/L氯化钙溶液或其他适宜溶液透析或超滤；加入乙醇至最终浓度为75%～80%，离心收集的沉淀物用无水乙醇及丙酮分别洗涤，然后用灭菌注射用水溶解，除菌过滤后即为多糖原液。提取过程应尽可能在15℃以下进行。
    2.2.6 原液检定
    按3.1项进行。
    2.2.7 保存及有效期
    于-20℃以下保存。自收获杀菌之日起，疫苗总有效期应不超过60个月。
    2.3 半成品
    2.3.1 配制
    用无菌、无热原PBS（pH6.5～7.5）稀释原液，可加入适量防腐剂。每1次人用剂量含多糖应不低于30μg。
    2.3.2 半成品检定
    按3.2项进行。
    2.4 成品
    2.4.1 分批
    应符合“生物制品分批规程”规定。
    2.4.2 分装
    应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
    2.4.3 规格
    每瓶5ml（10次人用剂量）、1ml（2次人用剂量）、0.5ml（1次人用剂量）。每1次人用剂量0.5ml，含多糖应不低于30μg。
    2.4.4 包装
    应符合“生物制品包装规程”规定。
    3 检定 
    3.1 原液检定
    3.1.1 鉴别试验
    采用免疫双扩散法（通则3403），本品与伤寒Vi血清48小时内应形成明显沉淀线，而与伤寒О血清不形成沉淀线。 
    3.1.2 化学检定
    3.1.2.1 固体总量 
    依法测定（通则3101）。
    3.1.2.2 蛋白质含量
    应小于10mg/g（通则0731第二法）。
    3.1.2.3 核酸含量
    应小于20mg/g，核酸在波长260nm处的吸收系数（）为200（通则0401）。
    3.1.2.4 О-乙酰基含量 
    应不低于2.0mmol/g（通则3117）。
    3.1.2.5 多糖分子大小测定
    多糖分子的KD值在0.25以前的洗脱液多糖回收率应在50%以上（通则3420）。
    3.1.2.6 苯酚残留量
    应不高于0.1g/L（通则3111）。
    3.1.3 无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.1.4 细菌内毒素检查 
    依法检查（通则1143），应符合批准的要求。
    3.2 半成品检定 
    无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.3 成品检定
    3.3.1 鉴别试验 
    按3.1.1项进行。
    3.3.2 物理检查
    3.3.2.1 外观
    应为无色澄明液体，无异物。
    3.3.2.2 装量
    依法检查（通则0102），应不低于标示量。
    3.3.2.3 渗透压摩尔浓度 
    依法检查（通则0632），应符合批准的要求。
    3.3.3 化学检定
    3.3.3.1	pH值
    应为6.5～7.5（通则0631）。
    3.3.3.2 防腐剂含量
    如加苯酚作防腐剂，其含量应不高于3.0g/L（通则 3113）。
    3.3.3.3 多糖含量
    称取0.5～0.6g琼脂糖，加入0.05mol/L巴比妥缓冲液（pH8.6）40ml中，加热溶胀完全，待冷却至约56℃时，加入伤寒Vi血清1ml，混匀后迅速倾倒于12cm×6cm的洁净水平玻板上，待凝胶凝固后用直径3mm的打孔器在距底边1.5cm处打孔。各孔中分别加入各稀释好的伤寒Vi抗原标准品溶液（浓度分别为：100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml）和本品5μl（本品做双孔）。靠近边缘一孔中，可加入10μl溴酚蓝指示液。加样后将玻板置于电泳槽上，滤纸搭桥，加样端与电泳仪阴极相连。采用0.05mol/L巴比妥缓冲液（pH8.6）为电极缓冲液，8V/cm恒压电泳至指示剂迁移到前沿。取下玻板浸泡于生理氯化钠溶液1～2小时后，覆盖洁净滤纸移至培养箱中过夜烤干。用考马斯亮蓝染色液染色至火箭峰出现，用甲醇-醋酸溶液脱色至背景清晰。准确测量火箭峰高，以标准品浓度的对数和相应的峰高作直线回归，得直线回归方程，将本品的峰高均值代入直线回归方程，求出本品浓度。每1次人用剂量多糖含量应不低于30μg。
    3.3.3.4 О-乙酰基含量
    每1次人用剂量应为0.061～0.091μmol（通则3117）。
    3.3.4 无菌检查
    依法检查（通则1101），应符合规定。
    3.3.5 异常毒性检查
    依法检查（通则1141），应符合规定。
    3.3.6 热原检查
    依法检查（通则1142），注射剂量按家兔体重每1kg注射0.025μg多糖，应符合规定。
    3.3.7 细菌内毒素检查
    依法检查（通则1143），应符合批准的要求。
    4 保存、运输及有效期
    于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，有效期为24个月。
    5 使用说明
    应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。
    伤寒Vi多糖疫苗使用说明
    【药品名称】
    通用名称：伤寒Vi多糖疫苗
    英文名称：Vi Polysaccharide Typhoid Vaccine
    汉语拼音：Shanghan Vi Duotang Yimiao 
    【成分和性状】 本品系用伤寒沙门菌培养液纯化的Vi多糖，经用PBS稀释制成。为无色澄明液体。
    有效成分：伤寒沙门菌Vi多糖。
    辅料：应列出全部批准的辅料成分。
    【接种对象】 主要用于部队、港口、铁路沿线的工作人员，下水道、粪便、垃圾处理人员，饮食行业、医务防疫人员及水上居民或有本病流行地区的人群。
    【作用与用途】 接种本疫苗后，可使机体产生体液免疫应答。用于预防伤寒。
    【规格】 每瓶5ml（10次人用剂量）、1ml（2次人用剖量）、0.5ml（1次人用剂量）。每1次人用剂量0.5ml，含伤寒Vi多糖应不低于30μg。
    【免疫程序和剂量】 （1）上臂外侧三角肌肌内注射。 
    （2）注射1针，剂量为0.5ml。
    【不良反应】 
    常见不良反应：
    可出现短暂低热，局部稍有压痛感，一般可自行缓解，不需特殊处理。
    极罕见不良反应：
    过敏性皮疹：一般接种疫苗后72小时内出现，应及时就诊。
    【禁忌】 （1）已知对该疫苗的任何成分过敏者。
    （2）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。
    （3）妊娠期妇女。
    【注意事项】 （1）以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者、哺乳期妇女。
    （2）用前摇匀。如出现摇不散的凝块、异物、疫苗瓶有裂纹或标签不清者，均不得使用.
    （3）疫苗开启后应立即使用，如需放置，应置2～8℃，并于1小时内用完，剩余均应废弃。
    （4）应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。
    （5）严禁冻结。
    【贮藏】 于2～8℃避光保存和运输。
    【包装】 按批准的执行。
    【有效期】 24个月。
    【执行标准】
    【批准文号】
    【生产企业】
    企业名称：
    生产地址：
    邮政编码：
    电话号码：
    传真号码：
    网 址：