普鲁卡因青霉素

普鲁卡因青霉素Pulukayin QingmeisuProcaine Benzylpenicillin
    
    本品为对氨基苯甲酸2-（二乙氨基）乙酯（6R）-6-（2-苯基乙酰氨基）青霉烷酸盐一水合物。按无水物计算，含普鲁卡因（C13H20N2O2）应为 38.0%～43.0%，含青霉素（C16H18N2O4S）应为56.2%～59.6% ，每1mg含青霉素应不少于1000单位。
    【性状】本品为白色结晶性粉末；遇酸、碱或氧化剂等即迅速失效。
    本品在甲醇中易溶，在乙醇中略溶，在水中微溶。
    比旋度  取本品，精密称定，加水-丙酮（2：3）溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含10mg的溶液，依法测定（通则0621），比旋度为+165°至+180°。
    【鉴别】（1）取本品，加丙酮-水（2：3）溶解并稀释制成每1ml中约含5mg的溶液，作为供试品溶液；另取盐酸普鲁卡因对照品，加丙酮-水（2：3）溶解并稀释制成每1ml中约含2mg 的溶液，作为对照品溶液（1）；取青霉素对照品，加丙酮-水（2：3）溶解并稀释制成每1ml中约含3mg的溶液，作为对照品溶液（2）。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-15.4%醋酸铵溶液（2：3）（用浓氨溶液或冰醋酸调节pH值至7）为展开剂，展开，晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液所显两主斑点的位置和颜色应分别与相应对照品的主斑点的位置和颜色相同。
    （2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液两个主峰的保留时间应与对照品溶液两个主峰的保留时间一致。
    （3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集511图）一致。
    以上（1）、（2）两项可选做一项。
    【检查】酸碱度  取本品，加水制成每1ml中约含60mg的悬浮液，依法测定（通则0631），pH值应为5.0～7.5。
    甲醇溶液的澄清度与颜色  取本品5 份，各0.3g，分别加甲醇5ml溶解后，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（通则0902第一法）比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色2 号标准比色液（通则0901第一法）比较，均不得更深。
    有关物质  取本品70mg，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密称取对氨基苯甲酸对照品16.80mg，置50ml童瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对氨基苯甲酸贮备液；分别精密童取供试品溶液1ml、对氨基苯甲酸贮备液2ml 置同一100ml量瓶中，用流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法（通则0512）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为缓冲液（取磷酸二氢钾14g和40%氢氧化四丁基铵溶液6.5g，溶解于约700ml水中，用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至7.0，用水稀释至1000ml，混匀）-水-乙腈（52：28：20）；流动相B为上述缓冲液（pH7.0）-水-乙腈（52：18：30）；先以流动相A等度洗脱，待普鲁卡因洗脱完毕后立即按下表进行线性梯度洗脱，检测波长为225nm。分別取青霉素、盐酸普鲁卡因和青霉素系统适用性对照品各适量，用对氨基苯甲酸贮备液溶解并稀释制成每1ml中分別含0.50mg、0.15mg和0.80mg的混合溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，青霉素应在25分钟内洗脱，除青霉素、普鲁卡因和对氨基苯甲酸外，应检出一个较大的青霉素主要杂质，出峰顺序为对氨基苯甲酸、普鲁卡因、青霉素主要杂质、青霉素。对氨基苯甲酸峰与相邻杂质峰、普鲁卡因峰与青霉素主杂质峰、青霉素峰与相邻杂质峰之间的分离度均应符合要求。精密量取供试品溶液和对照溶液各10μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，对氨基苯甲酸峰面积不得大于对照溶液的对氨基苯甲酸峰面积的0.5倍（0.024%），其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液的青霉素峰面积（1.0%）。
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    时间（分钟）  流动相A（%）  流动相B（%）
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         0          100         0
         1          100         0
         2           50        50
        27           50        50
        28          100         0
        38          100         0
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    青霉素聚合物  照分子排阻色谱法（通则0514）测定。
    色谱条件与系统适用性试验  用葡聚糖凝胶G-10（40～120μm）为填充剂，玻璃柱内径1.0～1.4cm，柱长30～40cm。流动相A为pH7.0的0.03mol/L磷酸盐缓冲液[0.03mol/L磷酸氢二钠溶液-0.03mol/L磷酸二氢钠溶液（61：39）]，流动相B为水，流速为每分钟1.5ml，检测波长为254nm。取0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液100～200μl注入液相色谱仪，分别以流动相A 、B进行测定，记录色谱图，理论板数按蓝色葡聚糖2000峰计算均不低于400，拖尾因子均应小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值应在0.93～1.07，对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值均应在0.93～1.07。取本品约0.3g，置10ml量瓶中，先加入N，N -二甲基甲酰胺约2ml使完全溶解，再用0.1mol/L蓝色葡聚糖2000溶液稀释至刻度，摇匀，取100～200μl注入液相色谱仪，用流动相A进行测定，记录色谱图，高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比应大于2.0。另以流动相B为流动相，精密量取对照溶液100～200μl，连续进样5次，峰面积的相对标准偏差应不大于5.0% 。
    对照溶液的制备  取青霉素对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。
    测定法  取本品约0.3g，精密称定，置10ml量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺2ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，立即精密量取100～200μl注入色谱仪，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图；另精密量取对照溶液100～200μl注入色谱仪，以流动相B为流动相进行测定。按外标法以青霉素峰面积计算，青霉素聚合物的量不得过青霉素的0.20% 。
    残留溶剂  取本品约1.0g，精密称定，置顶空瓶中，分别精密加入内标溶液（称取丙醇适量，用N ，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释制成每1ml中约含3mg的溶液）1.0ml、N ，N-二甲基甲酰胺4.0ml，密封，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取乙酸乙酯和正丁醇适量，加N ，N-二甲基甲酰胺定量稀释制成每1ml中约含乙酸乙酯和正丁醇各0.625mg的溶液。精密量取4.0ml，置顶空瓶中，再精密加入内标溶液1.0ml置同一顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。照残留溶剂测定法（通则0861第二法）测定，以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（或极性相近）为固定液的毛细管柱为色谱柱；起始温度为90℃，维持14分钟，继以每分钟20℃的速率升至180℃，维持5分钟；进样口温度为210℃；检测器温度为250℃；顶空瓶平衡温度为70℃，平衡时间为30分钟。取对照品溶液顶空进样，按丙醇、乙酸乙酯和正丁醇顺序依次出峰，各色谱峰之间的分离度应符合要求。再取供试品溶液和对照品溶液分别顶空进样，记录色谱图。按内标法以峰面积比值计算，乙酸乙酯与正丁醇的残留量均应符合规定。
    水分  取本品，照水分测定法（通则0832第一法1）测定，含水分应为2.8%～4.0% 。
    抽针试验  取本品1.5g，加水5ml制成混悬液，用装有4½号针头的注射器抽取，应能顺利通过，不得阻塞。
    细菌内毒素  取本品，依法检查（通则1143），每1000青霉素单位中含内毒素的量应小于0.10EU。（供注射用）
    无菌  取本品，用适宜溶剂使分散均匀，加青霉素酶灭活后，依法检查（通则1101），应符合规定。（供无菌分装用）
    【含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。
    色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以缓冲液（取磷酸二氢钾14g和40%氢氧化四丁基铵溶液6.5g溶解于约700ml水中，用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至7.0，用水稀释至1000ml，混匀）-水-乙腈（52：23：25）（用1mol/L氢氧化钾溶液或10%稀磷酸溶液调节pH值至7.5±0.05）为流动相；检测波长为235nm。取青霉素V钾对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含青霉素V钾2.4mg 的溶液，将此溶液与对照品溶液以1：3体积比混合，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，青霉素峰和青霉素V峰间的分离度应大于2.0。
    测定法  取本品约70mg，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相约30ml，超声使溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取青霉素对照品和盐酸普鲁卡因对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中分别约含青霉素0.8mg 和普鲁卡因0.54mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中C13H20N2O2和C16H18N2O4S的含量。每1mg的C16H18N2O4S相当于1780青霉素单位。
    【类别】β-内酰胺类抗生素，青霉素类。
    【贮藏】严封，在干燥处保存。
    【制剂】注射用普鲁卡因青霉素