胰岛素

胰岛素YidaosuInsulin
    C256H381N65O76S6 5778 
    本品系自猪胰中提取制得的由51个氨基酸残基组成的蛋白质。按干燥品计算，含胰岛素（包括脱氨胰岛素）应为95.5%～105.0%。
      每1单位相当于胰岛素0.0345mg。
    【制法要求】本品应从检疫合格猪的冰冻胰脏中提取。生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。
    【性状】本品为白色或类白色的结晶性粉末。
     本品在水、乙醇中几乎不溶；在无机酸或氢氧化钠溶液中易溶。
    【鉴别】（1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
      （2）取本品适量，加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液，取20μ1，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（pH 7.3）20μl、0.1%V8酶溶液20μ1与水140μ1，混匀，置37℃水浴中2小时后，加磷酸3μl，作为供试品溶液；另取胰岛素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。 照含量测定项下的色谱条件，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH 2.3）-乙腈（90：10）为流动相A，以乙腈-水（50：50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱。取对照品溶液和供试品溶液各25μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱圈。供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致。
    时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 
       0     90      10    
      60     55      45    
      70     55      45    
    【检查】相关蛋白质  取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含3.5mg的溶液，作为供试品溶液（临用新制，置10℃以下保存）。照含量测定项下的色谱条件，以含量测定项下0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH 2.3）-乙腈（82：18）为流动相A，以乙腈-水（50：50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱。调节流动相比例使胰岛素峰的保留时间约为25分钟。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算，A21脱氨胰岛素不得大于5.0%，其他相关蛋白质不得大于5.0%。
    时间（分） 流动相A（%） 流动相B（%） 
      0     78      22    
     36     78      22    
     61     33      67    
     67     33      67    
      高分子蛋白质  取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。照分子排阻色谱法（通则0514）试验。以亲水改性硅胶为填充剂（3～10μm）；以冰醋酸-乙腈-0.1%精氨酸溶液（15：20：65）为流动相；流速为每分钟0.5ml；检测波长为276nm。取胰岛素单体-二聚体对照品（或取胰岛素适量，置60℃放置过夜），加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，取100μl注入液相色谱仪，胰岛素单体峰与二聚体峰的分离度应符合要求。取供试品溶液100μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图。除去保留时间大于胰岛素峰的其他峰面积，按峰面积归一化法计算，保留时间小于胰岛素峰的所有峰面积之和不得大于1.0%。
      干燥失重  取本品约0.2g，精密称定，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过10.0%（通则0831）。
      锌  取本品适量，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液溶解 并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，作为供试品溶液。另精密量取锌单元素标准溶液（每1ml中含锌1000μg）适量，用0.01mol/L盐酸溶液分别定量稀释制成每1ml中含锌0.2μg、0.4μg、0.8μg、1.0μg与1.2μg的锌标准溶液。照原子吸收分光光度法（通则0406第一法），在213.9nm的波长处测定吸光度。按干燥品计算，含锌量不得过1.0%。
      细菌内毒素  取本品，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并用检查用水稀释制成每1ml中含5mg的溶液，依法检查（通则1143），每1mg胰岛素中含内毒素的量应小于10EU。
      微生物限度  取本品0.3g，照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）检查，1g供式品中需氧菌总数不得过300cfu。
      生物活性  取本品适量，照胰岛素生物测定法（通则1211）试验，实验时每组的实验动物数可减半，实验采用随机设计，照生物检定统计法（通则1431）中量反应平行线测定随机设计法计算效价，每1mg的效价不得少于15单位。
    【含量测定】照高效液相色谱法（通则0512）测定。
      色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm） ；以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸1.7ml，乙醇胺调节pH值至2.3，加水至1000ml）-乙腈（74：26）为流动相；柱温为40℃；检测波长为214nm。取系统适用性溶液20μl（取胰岛素对照品，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含40单位的溶液，放置至少24小时），注入液相色谱仪，记录色谱图，胰岛素峰与A21脱氨胰岛素峰（与胰岛素峰的相对保留时间约为1.2）之间的分离度应不小于1.8，拖尾因子应不大于1.8。
      测定法  取本品适量，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液 溶解并定量稀释制成每1ml中约含40单位的溶液（临用新制，或2～4℃保存，48小时内使用）。精密量取20μ1注入液相色谱仪，记录色谱图；另取胰岛素对照品适量，同法测定。按外标法以胰岛素峰面积与A21脱氨胰岛素峰面积之和计算，即得。
    【类别】降血糖药。
    【贮藏】遮光，密闭，在-15℃以下保存。
    【制剂】（1）胰岛素注射液 （2）精蛋白锌胰岛素注射液 （3）精蛋白锌胰岛素注射液（30R）