重组人胰岛素

重组人胰岛素Chongzu Re nYidaosuRecombinant Human Insulin
    
    C257H383N65O77S6    5807.69
    本品为重组技术生产的由51个氨基酸残基组成的蛋白质。按干燥品计算，含重组人胰岛素（包括A21脱氨人胰岛素）应为95.0%～105.0%。
    每1单位重组人胰岛素相当于0.0347mg。
    【制法要求】  本品为重组DNA技术产品，生产过程应符合《人用重组DNA技未产品总论[1]》（三部总论）的要求.。
    【性状】  本品为白色或类白色的结晶性粉末。
    本品在水、乙醇和乙醚中几乎不溶，在稀盐酸和稀氢氧化钠溶液中易溶。
    【鉴别】  （1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
    （2）取本品适量，加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液，取20μl，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液（pH7.3）20μl、0.1%V8酶溶液20μl与水140μl，混匀，置37℃水浴中2小时后，加磷酸3μl，作为供试品溶液；另取重组人胰岛素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH2.3）-乙腈（90：10）为流动相A，以乙腈-水（50：50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱。取对照品溶液和供试品溶液各25μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致。
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        时间（分钟）    流动相 A（%）    流动相 B（%）
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            0               90              10
            5               80              20
            45              40              60
            50              40              60
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    【检查】  有关物质  取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含3.5mg的溶液，作为供试品溶液。照含量测定项下的色谱条件，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH2.3）-乙腈（82：18）为流动相A，以乙腈-水（50：50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱。调节流动相比例使重组人胰岛素主峰的保留时间约为25分钟，系统适用性试验应符合含量测定项下的规定。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算，含A21脱氨人胰岛素不得大于1.5%，其他杂质峰面积之和不得大于2.0%。
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        时间（分钟）    流动相 A（%）      流动相 B（%）
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            0               78               22
            36              78               22
            61              33               67
            67              33               67
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    高分子蛋白质  取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。照分子排阻色谱法（通则0514）试验。以亲水改性硅胶为填充剂（5～10μm）；以冰醋酸-乙腈-0.1%精氨酸溶液（15：20：65）为流动相；流速为每分钟0.5ml；检测波长为276nm。取重组人胰岛素单体-二聚体对照品，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，取100μl注入液相色谱仪，重组人胰岛素单体峰与二聚体峰的分离度应符合要求。取供试品溶液100μl注入液相色谱仪，记录色谱图，扣除保留时间大于重组人胰岛素主峰的其他峰面积，按峰面积归一化法计算，保留时间小于重组人胰岛素主峰的所有峰面积之和不得大于1.0%。
    干燥失重  取本品0.2g，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过10.0%（通则0831）。
    炽灼残渣  取本品约0.2g，依法检查（通则0841），遗留残渣不得过2.0%。
    锌  精密称取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。另精密量取锌单元素标准溶液（每1ml中含Zn1000μg）适量，用0.01mol/L盐酸溶液分别定量稀释成每1ml中含锌0.2μg、0.4μg、0.6μg、0.8μg、1.0μg与1.2μg的梓标准溶液。照原子吸收分光光度法（通则0406第一法），在213.9nm的波长处测定吸光度，按干燥品计，含锌（Zn）量不得大于1.0%。
    微生物限度  取本品0.3g，照非无菌产品微生物限度检查，微生物计数法（通则1105）检查，1g供试品中需氧菌总数不得过300cfu。
    细菌内毒素  取本品，依法检查（通则1143），每1mg重组人胰岛素中含内毒素的量应小于10EU。
    菌体蛋白残留量  取本品适量，依法检查（通则3413[2]），每1mg重组人胰岛素中菌体蛋白残留量不得过10ng。
    外源性DNA残留量取本品适量，依法检查（通则3408[3]），每1剂量重组人胰岛素中宿主DNA不得过10ng。
    生物活性  取本品适量，照胰岛素生物测定法（通则1211），每组的实验动物数可减半，实验采用随机设计，照生物检定统计法（通则1431）中量反应平行线测定随机设计法计算效价，每1mg的效价不得少于15单位。
    【含量测定】  照高效液相色谱法（通则0512）测定。
    色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7ml、水800ml，用乙醇胺调节pH值至2.3，加水至1000ml）-乙腈（74：26）为流动相；流速为每分钟1ml；柱温为40℃；检测波长为214nm。取系统适用性溶液（取重组人胰岛素对照品，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，室温放置至少24小时）20μl，注入液相色谱仪，重组人胰岛素峰与A21脱氨人胰岛素峰（与重组人胰岛素峰的相对保留时间约为1.3）的分离度不小于1.8，拖尾因子不大于1.8。
    测定法  取本品适量，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.35mg（约10单位）的溶液（临用新配）。精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重组人胰岛素对照品适量，同法测定。按外标法以重组人胰岛素峰与A21脱氨人胰岛素峰面积之和计算，即得。
    【类别】 降血糖药。
    【贮藏】 遮光，密闭，在-15℃以下保存。
    【制剂】 （1）重组人胰岛素注射液 （2）精蛋白重组人胰岛素注射液